口腔癌患者外周血树突状细胞的体外培养及表型分析.pdfVIP

中文摘要 口腔癌患者外周血树突状细胞的体外培养 及表型分析 摘 要 目的：口腔颌面部肿瘤是头颈部肿瘤的重要组成部分。 一 在我国80％以上的口腔颌面部恶性肿瘤是鳞状细胞癌(简称 ·∥ 鳞癌)，目前对口腔癌的治疗手段是以手术为主的综合治疗， 由于颌面部能提供的切除面积有限，有时很难实现距肿瘤边 缘1．5cm清除病灶，而且手术本身造成的面部畸形严重破坏 了患者的口腔功能和心理健康。因此，如何能缩小手术范围、 有效控制临床亚病灶及微小病灶的发展亟待解决。近年来， c 随着树突状细胞(den“tice；1l，DC)体外诱导扩增技术的发 ． 一展，DC用于肿瘤免疫治疗的实验和临床研究日趋增多，DC 有望成为肿瘤免疫治疗的一种有效手段。抗原递呈细胞 cells，APC)与肿瘤细胞融合得到细胞融合 (ahtigenpresenting 疫苗以及基于树突状细胞的疫苗方案由于其明确的治疗效 果而受到广泛重视。已有研究成果确立了体外诱导DC成熟 在肿瘤免疫治疗中的地位。DC’是机体内最重要的，功能最 ． ’．强的专职性抗原递呈细胞，也是机体免疫应答的有力启动 ～。． 者。近年来，随着Dc的功能和生物学特性被不断认识，Dc 。 ．在肿瘤免疫、移植免疫和抗感染免疫等方面日益受到人们的 ? 重视，被运用于B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、前列腺癌、转移 性肾癌和多发性骨髓瘤等恶性肿瘤的临床尝试性治疗，并取 得了令人鼓舞的疗效。DC激发T细胞增殖及抗原递呈能力 00～1 是巨噬细胞和B细胞的1 OOO倍。但它是一微量细胞群， 中文摘要 在血液中仅占单核细胞总数的O．5％～1％，且缺乏特异性的 标记物，其分离纯化极其困难，体外不易长期培养，更难建 库，所以给研究及临床治疗带来了很大的困难。本试验通过 对口腔鳞癌患者外周血单核细胞来源的树突状细胞进行体 外培养，并对细胞形态、表型和功能，与正常人进行比较并 分析其临床意义为口腔癌的生物治疗奠定基础。 方法：研究对象为15例(均取自河北医科大学第四医院口 腔科2004年9月至2005年1O月住院的口腔鳞癌初诊患者)，均 未行过任何抗肿瘤治疗，发病部位包括舌、颊、牙龈、等处， 临床分期为III期和Ⅳ期，年龄在20～60岁范围内，性别比为1： 1，均经术后病理证实。对照组选择15例健康志愿者，两组 均排除感染、糖尿病、血液病和自身免疫性疾病。无菌采集 上述实验组和对照组每人外周血(20m1)置入淋巴分离液中经 离心分离外周血单个核细胞，吸取中间细胞层，用D—Hank’s 和I冲M11 640培养液洗涤细胞3次，弃上清，用含10％胎牛血 1 O 清的RPMI640培养液调整细胞浓度为1×17个／m1，然后接 种于6孔板，每孔3m1。5％C02，37。C条件下孵育2～3小时后， 吸出培养上清，用预热的培养基清洗板1次，以去除非贴壁 OOOu／m1rhGM—CSF 细胞(冻存)，获得贴壁的单核细胞，加含1 和500u／ml 7。C孵育5天，每孔加入 量换液并补充细胞因子。5％C02，3 5、7天用倒置显微镜观察DC形态，在培养的第7天收集DC 电镜观察超微结构。收集培养5天、7天和1O天的DC细胞行流 1