实验七维生素C的定量测定.docVIP

实验七　维生素C的定量测定 【目的和要求】 1．学习定量测定生素C的原理和方法 2．进一步掌握滴定法的基本操作技术 3．了解松针及蔬菜中维生素C的含量 【原理】 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸。它是具有L系糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性维生素。维生素C分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量更为丰富。维生素C具有很强的还原性。在碱性溶液中，加热并有氧化剂存在时，抗坏血酸易被氧化面破坏。在中性和微酸性环境中，抗坏血酸能将染料2，6－二氯酚靛酚还原成无色的还原型2，6－二氯酚靛酚。同时将抗坏血酸氧化成脱氢抗坏血酸。 氧化型2，6－二氯酚靛酚在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2，6–二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸尚未全部被氧化时，滴下的2，6–二氯酚靛酚立即被还原成无色。但溶液中的抗坏血酸一旦全部被氧化时，则滴下的2，6–二氯酚靛酚立即呈现红色。所以，当溶液从无色转变成微红色时，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚全部被氧化。此时即为滴定终点。从滴定时2，6–二氯酚靛酚标准的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。 该法简便易行，但有下列缺点：①在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗血酸的形式存在。它们同样具有维生素C的生理作用，但不能将2，6–二氯酚靛酚还原脱色。②生物组织提取物和生物体液中常含有其他还原性物质，其中有些也可以在同样实验条件下使2，6–二氯酚靛酚还原脱色。③在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。 【操作方法】 用分析天平准确地称取松针约0.5克。样品必须用温水洗去泥土，并在空气中风干。放入研钵中，加1％盐酸溶液5～10ml一起研磨。放置片刻，将提取液滤入50ml容量瓶。如此反复抽提2～3次。最后用1％盐酸液稀释到刻度并混匀。每次量取5ml放入小锥形瓶内进行滴定。 用微量滴定管，以0.001N2，6–二氯酚靛酚溶液（蓝色）滴定至提取液呈现淡粉红色，并保持15～30秒不褪。滴定过程必须迅速，不要超过2min。因为在本滴定条件下，一些非维生素C还原物质的还原作用较迟缓，快速滴定右以避免或减少它们的影响。 要使结果准确，滴下使用的2，6–二氯酚靛酚钠在1～4ml之间，若滴定结果超过此范围，则必须增减样品用量或交提取液适当稀释。 另取5ml　1％盐酸作空白对照滴定。 提取液和空白对照各做三份，对结果取平均值进行计算。 计算：维生素C毫克数／100克样品＝ （VA－VB）×C×T×100 D×W 式中：VA为滴定样品提取液所耗用的2，6–二氯酚靛酚的平均毫升数；VB为滴定空白对照所耗用的2，6–二氯酚靛酚的平均毫升数；C为样品提取液的总毫升数；D为滴定时所取的样品提取液毫升数；W为被检样品的质量。T为1毫升标准0.001N2，6–二氯酚靛酚溶液相当维生素C的毫克数，T的具体数目为mg/ml。 【试剂和器材】 　　一、试剂及材料 　　（1）松针、桔皮、水果或蔬菜 （2）1％盐酸溶液 （3）2，6–二氯酚靛酚钠溶液；将50mg　2，6–二氯酚靛酚溶解于约200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中。冷后稀释至250ml。装入棕色瓶内。放在 冰箱里保存。2，6–二氯酚靛酚不稳定, 每周必须重新配制，使用前需按照下法标定： 取5ml标准抗坏血酸溶液加5ml　1％草酸，以2，6–二氯酚靛酚滴定呈粉红色，并在15秒钟内不退色为终点。计算2，6–二氯酚靛酚溶液的浓度。 （4）标准抗坏血酸溶液：溶解100mg纯抗坏血酸粉状结晶于1％草酸中，然后稀释到500ml。 使用前临时配制。 二、器材 （1）锥形瓶（50ml） （2）小研钵。 （3）吸量管（10ml） （4）漏斗 （5）滤纸 （6）容量瓶（50ml） （7）微量滴定管（5ml） 【思考题】 指出本实验采用的定量测定维生素C的方法有何优缺点？