第二章荧光和化学发光分析法.ppt

* * * * 光照停止后，可持续一段时间 * 在不同波长激发下，在该固定荧光波长下的荧光发射。 * 在一固定波长的激发下，看化合物在不同波长处的荧光发射情况。 激发波长只影响荧光发射的强度 * C 分子共平面效应 芴 Φ = 1 联苯 Φ = 0.2 荧光分子的共平面性增加，则共轭体系大，有利于π→π* 跃迁。 2.1.2.2 有机物的荧光与其结构的关系 * 荧光黄 Φ = 0.92 酚酞 Φ = 0 2.1.2.2 有机物的荧光与其结构的关系 * D 取代基效应 1. 给电子取代基加强荧光 -NH2，-NHR ，-NR2，-OH， -OR ，-CN 产生 p →π共轭 2. 吸电子取代基减弱荧光 -C=O， -COOH ，-NO2 摩尔吸光系数小，荧光发射弱，系间跨跃较大，同样使荧光减弱。 2.1.2.2 有机物的荧光与其结构的关系 * D 取代基效应 2.1.2.2 有机物的荧光与其结构的关系 A 跃迁的类型 B 共轭效应 C 分子共平面效应 * 2.1.2.3 金属离子螯合物的荧光 （2）螯合物中金属离子的发光 （1）螯合物中配位体的发光 * 2.1.2.3 金属离子螯合物的荧光 （1）螯合物中配位体的发光 不少有机化合物虽然具有共轭双键，但由于不是刚性结构，分子处于非同一平面，因而不发生荧光。若这些化合物和金属离子形成螯合物，随着分子的刚性增强，平面结构的增大，常会发生荧光。 如8-羟基喹啉本身有很弱的荧光，但其金属螯合物具有很强的荧光。 * 2.1.2.3 金属离子螯合物的荧光 这类发光过程通常是螯合物首先通过配位体的????跃迁激发，接着配位体把能量转给金属离子，导致d?d? 跃迁和f?f?跃迁，最终发射的是d?d?跃迁和f?f?跃迁光谱。 （2）螯合物中金属离子的发光 * 2、溶剂 3、溶液黏度和温度 4、溶液的PH值 2.1.2.4 实验条件对荧光强度的影响 1、激发光源 * 2.1.2.4 实验条件对荧光强度的影响 1、激发光源 激发光强度I0大，荧光强度增大，灵敏度增高。 2、溶剂 主要表现为溶剂的极性、氢键、配位键的形成对化合物的荧光发生变化。 ?*→?跃迁类型：溶剂极性增大，跃迁能量降低，发生红移，荧光增强。 氢键、配位键的形成主要影响荧光分子的存在型体、电离状态，荧光强度和形状均发生很大变化。 * 3、溶液黏度和温度 黏度大，温度低，可减小碰撞引起的荧光熄灭，荧光强度增大。 温度升高，外转换的几率增加，荧光强度降低。 4、溶液的PH值 不同PH值下，荧光分子存在形式不同。 2.1.2.4 实验条件对荧光强度的影响 * 2.1.3 仪器装置 Cary Eclipse 荧光分光光度计 荧光、磷光化学/生物发光 美国瓦里安技术中国有限公司 * 一、荧光分光光度计结构流程 2.1.3 仪器装置 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 组成：激发光源、样品池、双单色器、检测器、显示系统。 特殊点：两个单色器，光源与检测器通常成直角。 * 1、激发光源 汞灯、碘钨灯、氙弧灯、激光等。 2、样品池 I0 It If 样品池四面透光。 2.1.3 仪器装置 * 4、检测器 一般采用硒光电池。 检测器的方向与激发光的方向成直角，以消除样品池中透射光和杂散光的干扰。 3、单色器 激发单色器： 选择激发光波长，用以分离出所需用的激发光。 发射单色器： 选择荧光发射波长，用以滤去杂散光、瑞利光、拉曼光和杂质所发射的荧光。 2.1.3 仪器装置 * 二、磷光分光光度计结构流程 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 斩波器（磷光镜） 利用荧光和磷光发射寿命的差别 通常情况下，样品池需要放在盛液氮的石英杜瓦瓶内，来测定低温磷光。 * 2、定量方法 1、定量依据 2.1.4 定量分析方法 * 1、定量依据 荧光强度 If 正比于吸收的光强度 Ia 和荧光量子产率Φ ： 由朗伯-比耳定律得： 荧光强度 If ： 2.1.4 定量分析方法 * 对于稀溶液，当 2.303?bC 0.05时： If ----荧光强度 I0 ----入射光强度 Φf ----荧光量子产率 b -- 吸收光程 ? -- 摩尔吸光系数 C -- 物质浓度 2.1.4 定量分析方法 * 2、定量方法 标准曲线法： F Cs Fx Cx 2.1.4 定量分析方法 * A 无机化合物的荧光分析 如Mg、Al、Ca等，本身不发射荧光，但与有机试剂可形成荧光配合物进行定量测定； 直接法：如8-羟基喹啉与Al离子反应生成荧光配合物 安息香，