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免疫测定的应用 第一组 组员：林宇婷，戴影，申蕾，张欢燕，俞松君，李昌盛 免疫学检测的用途非常广泛，它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对各种免疫学现象的研究，而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。 在免疫学检测法中根据细胞因子是可溶性细胞因子还是细胞内细胞因子可分为酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫分析法和流式细胞分析法、酶联免疫斑点法 。这四种方法ELISA是首选方法，前两者适用于可溶性细胞因子，后两者适用于细胞内细胞因子。 酶联免疫吸附法（ELISA）：ELISA是利用酶标记的抗原或抗体，在固相载体上进行抗原或抗体测定。其基本原理同免疫斑点法，只是固相载体不是硝酸纤维膜，而是聚苯乙烯或其它塑料微孔反应板。可进行定性或定量分析，是目前应用最广的方法。 用于检测细胞因子的ELISA方法常用双抗体夹心法。双抗体夹心法需制备针对细胞因子不同位点的两个单克隆抗体，一个抗体作为固相抗体用于包被，另一个作为标记抗体。可采用常规双抗夹心法，也可采用一步法。 由于血清中细胞因子的含量很低。常规ELISA法不能满足要求，需引入生物素－亲合素系统来提高灵敏度，即加入样品后加入生物素标记的另一个抗体，再加入亲合素及生物素化的酶，再加入底物进行显色，颜色与待检的细胞因子量呈正比。 免疫印记法（蛋白质印记技术）：经过SDS分离的蛋白质样品，转移至固相载体（如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作抗原，与对应的抗体起反应，再与酶或者同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影，以检查电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。 中国爆发了“三鹿”婴幼儿奶粉受污染事件，导致不少食用受污染奶粉的婴幼儿产生肾结石病症，甚至引发了危及生命的严重并发症。引起了全世界广泛的关注,因此食品中三聚氰胺的检测方法的研究成为了关注的热点问题。 三聚氰胺化学式为C3H6N6学名三氨三嗪，国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基”，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。三聚氰胺是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水(3.1g/L，常温)，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，对身体有害。 研究表明，三聚氰胺本身为低毒性，一般成年人身体会排出大部分的三聚氰胺，但长期摄入三聚氰胺，会造成生殖、泌尿系统的损害，且因其具有较强的黏性，可吸附形成结石的草酸、鞣酸及钙等物质沉积于泌尿系统，形成肾、输尿管和膀胱结石，还可诱发膀胱癌。 国家质量监督检验检疫总局家标准化管理委员会于2008年10月7日批准发布了检测三聚氰胺的国家标准，标准规定了高效液相色谱法、气相色谱—质谱联用法、液相色谱—质谱/ 质谱法、酶联免疫吸附试验等4种方法为三聚氰胺的检测方法 酶联免疫吸附试验检测食品中的三聚氰胺 采用的是三聚氰胺酶联免疫检测试剂盒来检测食品中的三聚氰胺。该试剂盒是利用免疫学竞争法的原理，先在酶标板微孔上预包被三胺卵清蛋白偶联物聚氰。检测时，加入三聚氰胺标准品或待测样品溶液及特异性的抗三聚氰胺抗体，包被在微孔板上的三聚氰胺卵清蛋白偶联物和标准品或样品中的三聚氰胺竞争性地与抗体结合，清洗数次，再加入酶标二抗， 形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的三聚氰胺浓度与吸收光强度成反比。  采用酶联免疫吸附法( ELISA) 具有特异性高、灵敏度高、稳定性好、操作简单，并可同时对大批量样品进行快速检测的特点，正是检测食品安全的最佳免疫学检测方法。 鉴于食品中三聚氰胺残留是涉及人类健康的公共卫生问题，应重视和加强监测工作，并且努力研究一些简便、快速、准确的检测方法，发展高效、高灵敏的确证技术，实现分析过程的自动化和智能化，提高分析效率，降低成本。 细胞因子是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。而其的生物学作用有抗感染和抗肿瘤、免疫调节作用、刺激造血细胞增殖分化、参与和调节炎症反应。 检测细胞因子的方法有生物学检测法、免疫学检测法、分子生物学检测法，而免疫学检测法是临床上最常用的。