采用噬菌体展示技术淘选桔青霉素模拟表位与研究.pdfVIP

摘要 摘要 桔青霉素((Citrinin,CIT)是由青霉属和曲霉属的某些菌株产生的一种广泛 污染玉米、大米等农作物的真菌毒素，对动物及人类具有肾毒性、致畸性等。 目前已有的检测CIT的方法有薄层层析法、高效液相色谱法、ELISA检测法等。 ELISA检测法灵敏度高、操作简单、适用于检测大量样品，使用较为广泛。但 是在ELISA检测中需要使用CIT毒素标准品，该标准品不仅价格昂贵且会对检 测人员造成身体损害。本研究以自制的抗CIT单克隆抗体为配体，采用噬菌体 展示技术首次淘选到CIT的模拟表位，并建立了CITPhage-ELISA方法。主要 研究内容如下: 1、采用噬菌体随机七肤库淘选CIT的模拟表位。以抗CIT单克隆抗体为 配体，采用逐轮减少抗体包被浓度，交换使用封阻液中蛋白质种类的方法，在 噬菌体七肤库中淘选CIT的模拟表位，经三轮淘选后，随机挑取30个克隆，以 间接ELISA确定阳性克隆，间接竞争ELISA确定CIT的模拟表位，结果显示 其中20个克隆为CIT的模拟表位。将此20个克隆进行测序，结果获得17种序 列，模拟表位的共有序列为:X-组氨酸 (H)一赖氨酸 (K)-X