7鹿感染牛型结核杆菌后IFNγ和IL4+mRNA表达.pdfVIP

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2017-09-01 发布于安徽
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7鹿感染牛型结核杆菌后IFNγ和IL4+mRNA表达.pdf

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中文摘要一是揭示红鹿抗结核杆菌感染的免疫反应途径。二是探索应用 TagMan Real-timePCR技术定量测定红鹿外周血单个核细胞中细胞因子mRNA 表达水平的可行性。实验中共采用20只红鹿，其中一组10只对牛型结核杆菌(协℃obacterium bovis,M.bovis)有抵抗力，另一组10只对M.bovi、敏感。两组各取5 只接种活的卡介苗 (BCG)，余下5只不接种卡介苗。接种卡介苗八周后所有的动物都注射有毒力的M.bovis.在注射M.bovis四周前 (即接种卡介苗四周后)以及六周后分别收集外周血单个核细胞 (Peripheral bloodmononuclearcells,PBMC).PBMC在与美洲商陆原 (Pokeweed Mitogen,PWM)共育后测定细胞因子 Interferon-Y (IFN-Y)和 Interleukin-4 (IL-4)mRNA的表达水平。mRNA的定量测定是在 ABIPRISM7700序列检测系统上应用TagManReal-timePCR技术进行的。 I.在红鹿接受M.bovis刺激前后PBMC中[IN-Y和IL-4mRNA的表达水平有显著差异。2.本试验建立了应用TagManReal-timePCR技术定量检测红鹿PBMC中细胞因子mRNA表达水平的方法。乡红鹿抵抗结核杆菌感染的免疫反应是复杂的混合细胞反应型，Th1,Th2 细胞反应均加强.Real-timePCR是一种敏感性强、特异性好、快速简便的mRNA定量检测方法。 mRNA 关键词:红鹿。牛型结核杆菌，Real-timePCR多IFN-Y，IL-4 ) ABSTRACT Object:Thisstudywastoelucidatetheimmunemechanismsoperativeinreddeer infectedwithMycobacteriumbovis(M.bovis)andestablishthefeasibility ofusingTagManReal-timePCRtodeterminetheexpressionlevelsof cytokinesmRNAinreddeer. Methods:Tenreddeer,whichhadbeenbredfromstagsresistanttoM.bovis,and tenreddeerbredfromsusceptibleanimalswereusedinthisstudy.Halfof theresistantandhalfofthesusceptiblegroupsofanimals,werevaccinated withlivebacilleCalmette-Guerin(BCG).Allofanimalshadbeen challengedwithvirulent似boviseightweeksaftervaccination.Peripheral bloodmononuclearcells(PBMC)werecollectedfourweeksbeforeand sixweeksafterchallengedwithvirulentM.bovis.CytokinesmRNA expressionlevelsweremeasuredfollowingstimulationofcellswith PokeweedMitogen(PWM).Interferon-y(IFN-y)andinterleukin-4(1L-4) mRNAexpressioninPBMCwasquantifiedwithTagManReal-