MMP-2siRNA沉默对食管癌上皮音质转化及侵袭力影响.pdf

摘要 MMP．2 siRNA沉默对食管癌上皮间质转化及侵袭力的影响 硕士研究生： 郭风华 导 师： 李珊珊教授 郑州大学基础医学院病理学教研室 河南省肿瘤病理重点实验室 河南郑州450052 摘 要 背景和目的 食管癌是我国最常见的消化系统恶性肿瘤之一，患者的死亡率在恶性肿瘤 中居第四位。食管癌的早期浸润转移是患者治疗效果不佳的主要原因，因此抑 制食管癌淋巴结转移和邻近组织侵袭是有效治疗食管癌、提高食管癌生存率的 关键。 肿瘤的侵袭转移指恶性肿瘤细胞脱落离开其原发部位，通过血液、淋巴液 等渠道转运到不连续的靶组织，继续增殖生长为同样性质肿瘤的过程。目前研 transition，EMT)是肿瘤发生浸润转 究认为上皮间质转化(epithelial．mesenchymal 移的重要必要的起始步骤。在EMT过程中，上皮细胞失去了极性，细胞间丢失 0C．cludents．1，ZO．1) 上皮性标志E．钙粘蛋白(E．cadherin)、紧密连接蛋白(zonula 时细胞的侵袭运动能力增强。大量研究表明多种信号通路参与了肿瘤细胞的 growth EMT过程，如Wnt、转化生长因子．IB(transforming 信号通路等。许多数信号分子的诱导作用都依赖于不同的细胞环境，而TGF．p则 被认为是几乎所有上皮组织发生EMT所必不可少的诱导因素。 基质金属蛋白酶(matix 转移关系密切的蛋白水解酶，其中MMP．2又在其中起到关键作用，MMP．2高 表达与人类多种恶性肿瘤浸润、转移潜能及预后有着紧密联系。不过目前有关 摘要 MMP．2在侵袭转移中的作用机制研究主要局限在其作为细胞外基质降解酶降解 ECM，或者刺激血管内皮细胞合成DNA,促进合成、释放多种血管生长的调节 因子等方面。有文献报道敲除鼠乳腺癌细胞的SMl2S基因时，EMT发生的同时 道，用山蓑若碱抑制肝细胞纤维化时，TGF．B的表达水平下调，同时MMP．2蛋 白的表达也随之下调。可见MMP．2也可能通过参与EMT来参与肿瘤的侵袭转 移过程，但食管癌中MMP．2是否参与EMT的发生，是否也可通过EMT参与食 管癌的侵袭转移过程国内外报道甚少。 因此本实验拟探讨MMP．2在食管癌EMT中的作用，特别是MMP．2在 TGF-IB信号通路介导EMT过程中的作用，为了进一步深入了解MMP．2在食管 癌侵袭转移中的作用机制提供实验基础。本实验首先采用RNAi技术特异性抑制 siRNA 在食管癌EMT发生时的作用。其次以外源性的TGF．pl刺激及与MMP．2 及对细胞侵袭能力的影响，分析MMP．2在由TGF．p1介导的EMT中的作用。 材料和方法 1 MMP．2 sil州A转染食管鳞癌细胞EC9706 1．1 设计合成siRNA，采用阳离子脂质体试剂瞬时转染食管癌细胞EC9706，利 用荧光定量PCR和Westemblot检测MMP．2siRNA转染后MMP．2基因的沉默 效果，并筛选适宜的转染浓度的MMP．2siRNA，以便于用于下一步实验。 1．2于倒置显微镜下观察MMP．2基因沉默后细胞的形态学变化； 1．3 Western．blot法检测MMP．2 胞中MMP．2、E-cadherin、vimentin蛋白的表达； 1．4 以MTF方法检测EC9706细胞增殖能力的变化； 1．5 chamber侵袭小室检测转染后EC9706细胞侵袭能力的变化； Boyden 1．6于转染MMP．2siRNA后48h，采用细胞划痕实验检测MMP．2基因表达下 调后食管癌EC9706细胞迁移能力的变化