2014年PCR技术以及常见问题解析.pptVIP

PCR技术应用及常见问题解析 南京凯基生物科技发展有限公司 目录 基因表达研究的背景 传统PCR技术（链式聚合酶反应） PCR反应体系以及反应程序 PCR常见问题分析 实时定量PCR（Real-time PCR） 实时定量PCR的原理 实时定量PCR采用的方法 实时定量PCR常见问题解析 基因表达的研究背景 基因表达研究策略 二、实验材料、仪器和试剂 1. 材料：人肾小管上皮细胞等样本组织 2. 仪器：微量移液器及吸头、PCR仪及PCR管 琼脂糖凝胶电泳设备、DEPC水等 3. 试剂：Trizol试剂（凯基试剂盒） RT-PCR试剂盒（凯基试剂盒） 3. RT Reaction 4. PCR Reaction 实时荧光定量PCR Real Time PCR and Conventional PCR 荧光定量PCR和常规PCR技术的区别 常规PCR是通过电泳对扩增反应的最终产物进行定性分析（定量不准确）； 荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每一个循环变得“可见”，通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA(or cDNA)的起始浓度进行定量的方法（准确定量）。 为了定量和比较的方便