2014年第7章 发酵工程制药(一).pptVIP

第七章 发酵工程技术概论 第一节 概述 发酵工程(fermentation engineering)又称为微生物工程，是利用微生物制造工业砂料与工业产品并提供服务的技术。 发酵工业中的化学反应是通过微生物完整细胞的综合生物化学过程来实现的。发酵工业以某种特定的产物为工艺的目的物，这就要求微生物细胞既能正常生长又能过量地积累目的产物。 发酵工程发展的4个阶段： 20世纪以前，利用传统的微生物发酵过程来生产葡萄酒、酒、醋、酱、奶酪等食品。 1900-1940年期间，新的发酵产品不断问世（酵母、甘油、乳酸、柠檬酸、丁醇、丙酮等。） 发酵工业大发展时期，青霉素工业化成功推动了发酵工业的发展。主要标志：深层培养、生物大规模化、多种抗生素、氨基酸、核酸发酵成功，甾体的微生物转化。 基因工程等高新技术应用阶段。 发酵工程内容：菌种的培养和选育、菌的代谢与调节、培养基灭菌、通气搅拌、溶氧、发酵条件的优化、发酵过程各种参数与动力学、发酵反应器的设计和自动控制、产品的分离纯化和精制等。 发酵工业的生产水平取决于三个要素：生产菌种、发酵工艺和发酵设备。 第二节 优良菌种的选育 菌种选育包括自然选育、诱变选育、杂交选育等经验选育方法，还包括控制杂交育种、原生质融合、基因工程等定向育种方法。 菌种选育的物质基础 不经人工处理，利用微生物的自然突变进行菌种选育的过程称为自然选育。（效率低、进展慢） 用人工方法来诱发微生物突变进行菌种选育的过程称为诱变育种。通常用物理、化学、生物等因素进行对微生物诱变，导致遗传物质DNA结构上发生变化。 （一）诱变育种的方法和原理 微生物诱变育种的目的是要使它向符合人们需要的方向变异。（筛选正向变异、定向变异） 诱变机制 由诱变而导致微生物DNA的微细结构发生的变化，主要分为微小损伤突变、染色体畸变即大损伤突变、染色体组突变三种类型。 （1）微小损伤突变：有碱基的置换和码组移动突变两种。 碱基的置换是点突变，包括转换和颠换。 码组移动突变（移码突变）是在DNA分子的某一位置缺失或插入非三整数倍对核苷酸碱基而使遗传密码移位。 （2）染色体畸变：由遗传物质的缺失重复或重排而造成的染色体异常突变。 易位 非同源染色体之间部分相连接 倒位 一个染色体的某一部分以颠倒顺序出现在原来位置上 缺失 一条染色体上失去一个或多个基因遗传物质的节段 重复 一条染色体上增加了某些基因的重复片段。 （3）染色体组突变：指细胞核内染色体数目改变，主要是由有丝分裂或减数分裂异常而产生的染色体数目或组数的变化。 2.诱变剂及其作用方式 有诱发基因突变并使突变率提高到超过自发突变水平的物理化学因子都称为诱变剂。 物理诱变剂：紫外线、X射线、γ射线、快中子、α射线、β射线、微波、超声波、电磁波、激光射线和宇宙线等。 化学诱变剂：碱基修饰物（烷化剂）；碱基类似物（5-溴尿密啶）；嵌入染料（吖啶橙、溴化乙锭） 生物诱变剂：质粒、噬菌体、DNA转座子等。 （二）诱变和筛选 进行诱变育种时，首先要制定明确的筛选目标，其次是制定合理步骤，再次是建立正确快速的测定方法和摸索培养最适条件。 诱变育种示意图： 合理的筛选方法与程序是菌种选育的另一个重要问题。此过程中，初步筛选又是关键性的一步。（随机筛选、“理性化筛选”） 实用意义较大的初筛方法有： 自身耐药突变株 结构类似物或前体类似物的耐受突变株 营养缺陷型及其回复突变株 原生质体融合 原生质体融合就是把两个亲株分别通过酶解去除细胞壁，使菌体细胞在高渗环境中释放出由原生质膜包被着的球状体，在高渗条件下混合两个亲株的原生质体，由PEG作为助融剂使它们相互凝集发生细胞融合，接着两亲株细胞基因组由接触到交换，从而实现遗传重组，在再生细胞中就有可能挑选到较理想的重组子。 原生质体融合的一般程序溶壁→获得原生质球→原生质体融合（PEG助融） →再生培养基培养→筛选融合重组子 影响融合的因素* 菌龄* 培养基成分* PEG* 外界因素 原生质体融合育种（操作简便，重组频率高，是一种很有效的遗传育种手段。） 第三节 发酵的基本过程 发酵的基本过程为：菌种→ 种子制备→ 发酵→ 发酵液预处理→提取精制 第四节 发酵方式 分批发酵 将全部物料一次投入到反应器中，经灭菌、接种，经过若干时间的发酵后再将发酵液一次放出的操作过程。 补料分批发酵 将种子接入发酵反应器中进行培养，经过一段时间后，间歇或连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的培养方法。 连续发酵 将种子接入发酵反应器，搅拌培养至一定菌体浓度后，开动进料和出料的蠕动泵，以控制一定稀释率进行不间的培养，发酵体系处理平衡状态，可为微生物提供较恒定的生活环境。 第五节 发酵工艺控制 培