MyoD调控肺癌细胞中NGAL基因基础表达.pdfVIP

MyoD 调控肺癌细胞中NGAL 基因的基础表达1 1,2 2 1,2 3 2 1 常静霞 ，许丽艳 ，袁华敏 ，杜则澎 ，蔡唯佳 ，李恩民 1 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室，汕头 (515041) 2 汕头大学医学院肿瘤病理研究室，广东省免疫病理重点实验室，汕头 (515041) 3 汕头大学理学院生物系，汕头 (515063) E-mail ：nmli@ 摘 要：中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL ）是lipocalin 家族的一个成员。研究发现 NGAL 基因在许多肿瘤组织细胞中过表达，然而过表达的表达调控机制尚不清楚。本文以肺 癌细胞系A549 和95D 为研究对象，通过对NGAL 启动子区(-1431~+84)的缺失和突变分析， 检测报告基因活性，研究发现含有肌肉调节因子（MRFs ）结合位点的-106~-79 区间可能是 NGAL 基因的最小功能启动子区。而进一步的凝胶滞留、超滞留实验和Western blotting 检测 证明MRFs 家族中的MyoD 能够调控NGAL 基因的基础转录活性。 关键词：NGAL ，转录调节因子，MyoD ，最小功能启动子区，肺癌细胞 中图分类号：Q784；R735.1 1. 引言 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL ）， 是 1993 年由 Kjeldsen 等人在中性粒细胞内首先发现的 25 kD 糖蛋白，是脂质运载蛋白 （Lipocalin ）家族的成员之一。近年来研究发现，NGAL 在有炎症反应的上皮细胞中也有表 达[1]，而且在不同的组织和细胞的病理及生理条件下具有多种功能表现形式。NGAL 作为小 分子铁结合蛋白能够捕获铁而起到抑菌剂的作用 [2] ；NGAL 参与细胞分化过程并在凋亡中扮 演存活因子的角色[3] ；在肿瘤细胞或组织中，如肺癌、结肠癌、肝癌、乳腺癌和胰腺癌，能 够检测到NGAL 的上调表达[4]，这提示NGAL 可能与肿瘤的发生发展密切相关。有人研究发 现NGAL 能与MMP-9 相互作用，使MMP-9 免被降解，从而导致MMP-9 的活性维持在一定 水平，这可能是NGAL 在肿瘤进程中体现其功能的重要表现之一[5,6] 。本课题组研究发现， NGAL 在人类永生化食管上皮细胞恶变过程中显著过表达[7]，而且反义封闭NGAL 的表达能 够使食管癌细胞中的MMP-9 活性明显降低，侵袭能力明显减弱，这表明NGAL 确实在促进 肿瘤细胞的侵袭转移中发挥作用[8] 。然而，迄今为止，关于NGAL 基因在肿瘤细胞中的过表 达调控机制尚未阐明。 Cowland 等人曾研究发现在肺泡Ⅱ型上皮细胞A549 中，IL-1β能够通过NF-κB 和 IκB-ζ 等转录因子的激活，使NGAL 的表达水平上调10 倍以上[9,10] 。我们在食管癌EC109 细胞中 研究NGAL 对TPA 诱导的反应性时，发现在NGAL 基因5′侧翼区-152~-60 区间存在有TPA 反应元件，而且基础表达的核心区间与此一致[11] 。Gombart 等通过C/EBPε缺陷鼠证明C/EBPε 能够增强中性粒细胞中NGAL 的转录[12] 。Cowland 曾指出在A549 细胞中NGAL 基因5′侧翼 区-153~-90 区间内可能含有对基础表达至关重要的调控元件[9] 。但是, 目前为止，这些调控 元件及其与其相互作用的转录因子并没有被鉴定出来。为此，本文在以往研究工作基础上， 研究证明在95D 和A549 细胞中NGAL 基因5′侧翼区-106~-79 区间是其最小功能启动子区， 而且与其发生相互作用的转录因子MyoD 能够调控NGAL 基因的基础转录活性。 1本课题得到国家自然科学基金面上项目），中国高等教育博士科研基金项 目（20050560002, 20050560003 ），广东省自然科学基