荧光法研究外源性小分子对淋巴细胞钙信号的影响.docVIP

荧光法研究外源性小分子对淋巴细胞钙信号的影响 【摘要】：细胞内游离钙离子的浓度及其分布的变化代表着某种细胞功能的启动、加强和抑制,是形成Ca~(2+)信号的基础。破译不同型式的Ca~(2+)信号所代表的生物学意义,可以大大加深人们对淋巴细胞功能调节机制的认识,并进一步探索外源性刺激对免疫细胞钙信号系统的扰动机理。本文运用两种测定胞内游离钙的荧光探针fura-2、fluo-3,以及测定细胞膜电压的带负电荷类菁荧光染料Bis-oxonol,应用荧光光谱仪与激光共聚焦扫描显微镜分别在多细胞和单细胞两个层面研究了外源性化学小分子青霉素G、头孢哌酮和丙烯酰胺对急性提取的人外周血淋巴细胞胞内游离钙离子信号的影响。选择肌浆网钙泵抑制剂(Thapsigargin)、非特异性钙通道抑制剂La~(3+)、Ni~(2+)、电压依赖L型钙通道抑制剂尼卡地平(Nicardipine)、电压依赖N型钙通道抑制剂芋螺毒素(ω-conotoxin)和fura-2荧光猝灭剂Mn~(2+)参与外源性小分子对胞内游离钙离子信号的干扰过程,分析了这些外源小分子引发淋巴细胞胞内钙水平的升高和降低现象的作用机制。以荧光光谱学方法对抗生素的用药安全问题、丙烯酰胺的食品安全问题给出基础数据。同时建立了丙烯酰胺SPE-HPLC-UV的检测方法。第一章阐述了细胞钙离子信号转导的研究动态,简单介绍了淋巴细胞胞内钙离子水平的调控通路,综