CpTI蛋白在大肠杆菌中高效融合表达及纯化与活性测定.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! ! ’( ) ! *’ ) ! 年 月 #$$% ! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,-.,/0 #$$% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !#$ 蛋白在大肠杆菌中的高效融合表达及其纯化与活性测定 # ! ! # ! 杨丽琛 常团结 陈宛新 杨晓光 朱 祯 ! （中国科学院遗传研究所植物遗传分子操作开放实验室，北京 !$$!$!） # （中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室，北京 !$$$3$ ） 摘 要 豇豆胰蛋白酶抑制剂 （ ）基因（ ）因其抗虫谱广及不易耐受等优点在植物基因 6’IJ, ;/0JHA- K-CALAF’/ !3 45 工程中得到广泛应用。为进行遗传修饰食品（ ， ）中所含 基因表达产物的安全性评 M-FAG,((0 @’NAOAN O’’NH MP= !3 45 价，我们需要在体外微生物体系中获得大量的6J;K 蛋白。采用JM?Q 融合蛋白表达系统，将 6J;K 与MR; 的编码序 列在大肠杆菌7S#! 中进行融合表达，表达产物达到菌体总蛋白的9$ T 。经一步M(.F,FCA’- RJC/’H 97 亲和纯化， 融合蛋白MR;16J;K 纯度达到$ T 以上。将;C/’@LA- 蛋白酶与融合蛋白过夜作用，可获得切掉了MR; 标签的6J;K 蛋白。活性测定显示MR;16J;K 及6J;K 蛋白均具有明显的胰蛋白酶抑制剂活性。用纯化的融合蛋白免疫家兔还可 诱导产生高效价的抗体，经?SKR8 检测抗体滴度U !V#$$$$ 。WHF/- 7(’FFA-E 实验显示，无论是菌体超声裂解后总蛋 白中的6J;K 蛋白或是经纯化后的6J;K 蛋白均可与自制的抗体发生特异性结合。这为进一步进行6J;K 蛋白的安 全性评价工作奠定了良好基础。 关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂，遗传修饰食品，安全性评价，融合表达，活性测定 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） X%# 5 !! 8 !$$$1%$:! #$$% $!1$$:%1$: 豇豆胰蛋白酶抑制剂（ ， 布广泛且为害严重的是：二化螟、三化螟、大螟等鳞 6’IJ, ;/0JHA- K-CALAF’/ ［］ 6J;K）是一种植源性的抗虫蛋白，来源于有悠久食 翅目害虫3 。因此，培育具有抗虫能力的水稻新品 用历史的豇豆栽培品种加利福尼亚黑眼豆，属丝氨 种是控制水稻害虫的一条重要途径，且可避免化学 ［］ 酸蛋白酶抑制剂的一种! 。而农业害虫主要以丝氨 杀虫剂对生态环境的破坏。我们实验室已成功地将 酸蛋白酶进行蛋白质的消化，若昆虫摄入 6J;K 后， !3 45 基因转化模式植物烟草，并获得了高效抗虫转 ［］ 其蛋白消化酶的活性将受到抑制；同时，蛋白酶和蛋