GCV对肝癌细胞株毒性作用.pdfVIP

中国癌症杂志 2010年第2o卷第11期 826 CHINA 0NCOLOGY 2010 go1．20No．11 hNIS／TK基 因共转染介导 I／GCV 对肝癌细胞株的毒性作用 [摘要] 背景与 目的：与传统的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (herpesSimplexvirusthymidinekinase， HSV—TK)／N氧鸟苷 (ganciC1OVir，GCV)肿瘤 自杀系统相 比，人钠 ／碘 同向转运体 (human sodium—iodide symporter，hNIS)是近年来发现的新型治疗基因。然而，两者的疗效尚需进一步提高。本研究旨在探索hNIS介 导的放射性核素体系与ttSV—TK／GCV自杀基因体系对肝癌细胞的联合毒性作用。方法：构建EF1—0启动子调控下 的hNIS的表达载体与CMV启动子调控下的GFP和HSVTK共表达载体 ，慢病毒包装后转染肝癌细胞HepG2，荧光显 微镜下观察重组肿瘤细胞HepG2／NTG荧光蛋 白的表达；采用RT—PCR技术进一步检测 目的基因hNISfEHSV—TK的表 达情况：MTT检NGCV村HepG2／NTG的杀伤作用；摄碘试验及流出试验评价HepG2／NTG对碘的摄取及滞留情况； 最后通过克隆形成实验评价ccvfn”I对HepG2／NTG的单独及联合杀伤作用。结果：RT—PCR技术、荧光显像证实 hNIS、GFPf~HSV—TK基因在肝癌细胞 中成功表达 ：与对照组相 比，HepG2／NTG的摄碘高出76倍 ，20min摄碘率最 高，其后表现 出碘外流 ，有效半衰期不到10min，同时这种碘摄取能被NaCIO特异性抑制 。GCV或”I对HepG2／ NTG的毒性作用呈现剂量依赖性：5O g／mLGCV作用72h后，实验组细胞的存活率仅为 (33．98±2．71)％；放射 性浓度为7．4MBq／mL的”I处理7h后 ，细胞 的存活率仅为 (41．17±0．72)％；6cvfn…I联合作用后 ，细胞 的存活 率仅为 (8．55±1．22)％，较单一药物作用细胞存活率下降了6倍。结论 ：”I／GCV对重组肝癌细胞产生显著的毒 性作用 ，提示慢病毒介导hNIS／TK基 因共转染介导肿瘤 的放射化学治疗是可行的。 [关键词 ] 放射治疗； 基因治疗； 肝癌； 钠／碘同向转运体； 单纯疱疹病毒胸苷激酶 中图分类号：R73362 文献标识码：A 文章编号：1007—3639(2010)1卜082606 Toxicityof。引I／GCV tohepatocarcinom afollowingCO·expression ofhum an sodium iodidesymporter geneandherpessimplex virusthym idinekinasegene GU0 Guo-yin~ CHEN Li一6。．LIU Tian一 珏n．GUOLiheZHUIRuisen (xinyuan InstituteofMedicineandBiotechnology,Schoolof LifeSciences．ZhejiangSciTechUniversity,HangzhouZhejiang3100l China) Correspondence tO：CHENLibo E-maih libochen888#hotmail．com [Abstract] Backgroundandpurpose：Herpessimplexvirusthymidinekinase(HSV-TK)gene／ganciclovir fGCV、hasbeenwidelyusedasaform oftraditionalgenetherapywhereasthesodium—iodidesymportergene(NIS) hasbeenfoundtobeanoveltherapeuticgene．However，thetherapeuticeffectsofbothge