006(金宁一)病毒学领域专家答辩.pptVIP

免疫小鼠分组和采样 戊肝主要流行于亚洲、非洲和中美洲的发展中国家。 亚洲：主要流行于印度、尼泊尔、巴基斯坦、阿富汗、缅甸、印度尼西亚、泰国、日本、中国、前苏联中亚地区和黎巴嫩等； 非洲：主要流行于阿尔及利亚、突尼斯、埃塞俄比亚、苏丹、索马里、赞比亚和尼日利亚等； 中美洲：主要流行于墨西哥。但在美国、英国和法国等发达国家中也有散发病例发生。 八、戊肝病毒跨种间感染与传播机制研究 四个主要的基因型： 基因型Ⅰ：亚洲和非洲 基因型Ⅱ：墨西哥和尼日利亚 基因型Ⅲ：美国、意大利、 希腊、西班牙等部分欧洲国家、阿根廷 基因型Ⅳ：中国大陆、台湾省、美国部分地区 1、动物及人类标本的收集与检测 2、分子流行病学研究 3、HEV的分离培养、纯化与基因组克隆 4、HEV受体研究 5、HEV致病机理研究 戊肝病毒（HEV）研究 2004－ 电镜观察 人 血清标本 粪便标本 粪便标本 鹿 血清标本 胆汁标本 RT-PCR RT-PCR ELISA ELISA 猪 血清标本 粪便标本 胆汁标本 RT-PCR ELISA 抗-HEV(IgM) (+) 20% 胆汁标本 获得目的带（730bp) (369bp) 抗-HBV(IgG) (+) 病料处理 病毒富集 细胞培养 （A549） 测序 血清标本 获目的带 （1200bp) 测序 (HEV,HBV,HCV) (HEV,HBV,HCV) (HEV,HBV,HCV) Vaccinia virus 体内重组 rVV Cell 1×105 HA HA ATI HIV-1 Env ATI HIV-1 Gag HIV-1 Gag—Env ATI 1、国外流行株HIV-1/HIV-2基因工程 预防用活载体疫苗研究 (1990年—1997） HA HA ATI HIV-2 Env ATI HIV-2 Gag Gag和Env表达量要高于早期表达，表达量在感染24小时为最高; 表达量与单一表达完整Gag相似 Gag-Env嵌合蛋白的rVV免疫小鼠 诱导产生抗Gag和Env的抗体 体内重组 重组痘苗病毒均能表达HIV-2 Env和Gag 在重组病毒感染早期、晚期表达HIV-2 Env蛋白的量略有不同，表达产物分子量分别约为57kDa和42kDa 具有良好的反应原性和免疫原性 第三部分 AISD病基因工程疫苗研究 Vaccinia virus 体内重组 rVV Cell 1. 脾 CD4＋、 CD8＋ 2. 脾细胞对ConA、LPS 3. 脾CTL活性检测 4. 抗体测定 表达量 2、HIV-1型巨分子与细胞因子 共表达重组活载体疫苗构建研究 HA HA ATI HIV-1 Env Gag Gag——Env HIV-1 Env HIV-1 Gag IL-2 IL-6 IFN-a2b IL-2 IL-6 IFN-a2b 更好的免疫原性 三次的效果好 免疫佐剂作用 追加DNA疫苗最好 pcDNAGag PCMV Gag pcDNAGP PCMV Gag gp120 pcDNAgp120 PCMV gp120 pGPIL2 PCMV gag gp120 IL2 pGPIL6 PCMV gag gp120 IL6 pEIL2 PCMV gp120 IL2 pGIL2 PCMV gag IL2 pEIL6 PCMV gp120 IL6 pGIL6 PCMV gag IL6 pEIFN PCMV gp120 IFN pGIFN PCMV gag IFN 1. 脾 CD4＋、 CD8＋ 2. 脾细胞对ConA、LPS 3. 脾CTL活性检测 4. 抗体测定 ELISA鉴定 Cell 3、国外/国内流行株HIV-1/HIV-2基因工程 预防用DNA疫苗研究 (1997年—） 构建系列HIV-2型DNA疫苗研究 pcgag PCMV Gag pc gag-gp105 PCMV Gag gp105 pcgp105 PCMV gp105 pIRES1gag PCMV Gag pIRES1gag-gp105 PCMV Gag gp105 pIRES1gp105 PCMV gp105 1. 脾 CD4＋、 CD8＋ 2. 脾细胞对ConA、LPS 3. 脾CTL活性检测 4. 抗体测定 ELISA鉴定 Cell 2200bp 264bp 1630bp 90kDa 85kDa gp105 重组菌的诱导表达 tgp105 SDSWestern blot GS115/p1 :23%,1