海洋真菌Caldariomyces fumago产氯过氧化物酶双水相提纯条件.pdfVIP

第 8卷第6期 生 物 加 工 过 程 Vo1．8NO．6 2010年 11月 ChineseJournalofBioprocessEngineering NOV．2010 doi：10．3969／j．issn．1672—3678．2010．06．009 海洋真菌 Caldariomycesfuma~o产氯过氧化物酶的 双水相提纯条件 陈 军，杜 宁，许甜甜，夏志华，张书翠，朱旭国 (上海师范大学 生命与环境科学学院，上海 200234) 摘 要：采用聚乙二醇(PEG6000)在 (NH )S0 高饱和度下沉淀夹带蛋 白质富集氯过氧化物酶，再利用磷酸盐溶 液复溶解共沉淀物形成的双水相萃取体系高浓度回收酶蛋白，最后再经SephadexG一100柱层析纯化获得高纯度 酶试样。结果显示：氯过氧化物酶与PEG共沉淀总活力回收率达85．5％，酶在优化的PEG／磷酸盐双水相系统中 上下相分配系数k在0．341以下，酶活力回收率达到69．1％，纯度提高了21．57倍，柱层析可使酶纯度进一步提高 到24．79倍 ，总回收率为37．75％。 关键词：Caldariomycesfumago；氯过氧化物酶；双水相；萃取 中图分类号：TQ920．6 文献标志码 ：A 文章编号：1672—3678(2010)06—0046—06 PurificationofchlOr0per0xidasefrom amarinefungus Caldariomycesfumagobyaqueoustwo-phasesystem CHEN Jun，DU Ning，XUTian—tian，XIA Zhi—hua，ZHANG Shu—cui，ZHUXu—guo (CollegeofLifeandEnvironmentScience，ShanghaiNormalUniversity，Shanghai200234，China) Abstract：ThehydrophilicpolymerPEG6000wasusedtoCO-precipitatewithchloroperoxidase(CPO)in thesaturated ammonium sulfate solution．Then，a aqueoustwo—phase system ofPEG／phosphatewas formedbasedontheCO—precipitationresolutiontoextractedhighercompositionCPO，andthepurityCPO samplefrom SephadexG-100 chromatographicsystem wasobtained．Resultsshowed thattheCPO yield was85．5％ byCO—precipitatewithPEG inthepresenceofthephosphatesolution．Intheaqueoustwo— phasesystem ，CPO wasdissolvedinthebottom phase，thepa~itioncoefficientkwaslowerthan0．341， theyieldreached69．1％ ．andthepurificationratioincreased21．57times．ThepurityofCPO wasfurther improvedto24．79timesbycolumnchromatography，thetotalyieldofCPOwas37．75％ ． Keywords：Caldariomycesfumago；chloroperoxidase；aqueoustwo—phase；extraction 海洋真菌Caldariomycesfumago是 目前发酵生产 色素P一450高度相似 。作为过氧化物酶，CPO 氯过氧化物酶(chloropero