RNAi技术分析——伯信生物.pdfVIP

RNAi 技术部 伯信生物科技有限公司 RNA干扰（RNA interferene，RNAi）： 指生物体内利用双链RNA诱导同源靶基因的 mRNA特异性降解，从而导致转录后基因沉默的现 象。 RNA干扰的发现 90年代初，美国和荷兰的两个转 基因植物实验组Rich Jorgensen和同 事,在对矮牵牛(petunias)进行的研 究中有个奇怪的发现:将一个能产生 色素的基因置于一个强启动子后,导 入矮脚牵牛中,试图加深花朵的紫颜 色,结果没看到期待中的深紫色花朵, 多数花成了花斑的甚至白的。也就是 说转基因的植株不仅没有新基因表 达，反而使原有的色素基因也受到了 抑制，Jorgensen将这种现象命名为 共抑制 (cosuppression) 共抑制 94年Cogoni等证明真菌中亦有类似 现象，此称为基因压制 (quelling)。 基因压制 RNAi的发展 时间 作者 对象基因 目标生物 命名 1990 jorgensen和其 chs 矮牵牛 共抑 同事 制 1994 Macino和 类胡萝卜素 粗糙红色链 基因 Cogoni 合成基因 孢霉 压制 1995 Su Guo Par-1 秀丽新小杆 线虫 1998 Andrew Fire和 RNA干 Craig Mello 涉 在随后的时间，很快人们就发现RNA干扰现象广泛存在于从 植物、真菌、线虫、昆虫、蛙类、鸟类、大鼠、小鼠、猴 一直到人类的几乎所有的真核生物细胞中。 2000年提出RNAi作用机制模型。 2001年RNAi技术被《Science》评为年度十大科技进展之一。 2002 《Science》杂志评为 “2002年的重大突破” 2006 Nobel Prize in Physiology or Medicine “蓝月亮” 诺贝尔奖 经济效益 难得 RNAi？？？ RNAi的作用机理: 通过核酸酶Dicer切割dsRNA生成21-23 nt 小干扰RNA（siRNA），继 而由siRNA识别并靶向降解同源靶基因mRNA，从而抑制靶基因的表达。 RNAi的放大效应机制 RNAi研究的一般技术路线 1、siRNA序列设计注意事项 选择以AA开头的19-21nt长的序列 靶定序列从起始密码子下游75-100个nt处开始，到终 止密码子上游75-100nt处结束 选择 2-4个靶定序列，以筛选特异性最好的进行实验 选择的序列中 GC含量在 30-70%,最好在50%左右,在 一排序列中避免出现3