2010烙铁头蛇毒中一个具有抗补体活性金属蛋白酶纯化和性质的研究.pdfVIP

· 1220 ‘ 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2010Sep；26(9)：1220～5 烙铁头蛇毒中一个具有抗补体活性金属蛋白酶 的纯化和性质研究 闫银萍 ，孙黔云 (1．贵州大学生命科学学院，贵州 贵阳 550025；2．贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳 550002) 中国图书分类号：R392．11；R345．63；R364．5；R996．3； 多种蛋白质、多肽及酶类，很多蛇毒都对补体系统有 R977．3；R996．3 作用 j，蛇毒已成为寻找和发现新型抗补体蛋白的 文献标识码：A 文章编号：1001—1978(2010)09—1220—06 重要资源库。烙铁头蛇 (Trimeresurusmucrosquama． 摘要：目的 从烙铁头蛇毒中筛选分离抗补体活性蛋白，并 tus)是我国常见剧毒蛇之一，主要分布在我国南方 对其部分生物学活性开展研究，以了解其在蛇伤中的病理生 及台湾地区，其蛇伤较为常见，临床主要表现为局部 理作用和潜在的应用价值。方法 采用蛋白层析技术分离 出血、肿胀、疼痛，严重时血液不凝，全身出血等 J。 纯化抗补体活性蛋白，测定其分子量、等电点、抗补体作用、 至今已从烙铁头蛇毒中分离纯化出与纤溶和血小板 多种蛋白水解酶活性、水肿活性及出血活性。结果 从烙铁 相关的多个活性成分 j，但总体上对烙铁头蛇毒 头蛇毒中分离纯化出一个抗补体活性蛋白TMAC一1，表观分 子量约为25ku，等电点为 9．0。TMAC一1能够抑制补体经典 尚缺乏系统深入的研究。针对烙铁头蛇毒蛋白开展 途径和替代途径的溶血，预孵条件下，其 Ic。分别为62、29 相关研究对于认识和揭示烙铁头蛇伤机制和临床治 mg·L～；不预孵条件下，其 Ic50为 263、246mg ·L～。 疗 以及潜在应用价值具有重要意义。本文报道了烙 TMAC一1能够裂解 c3、c5，但裂解产物不能诱导内皮细胞 P— 铁头蛇毒中一个具有抗补体活性金属蛋白酶的分离 selectin的表达。TMAC一1能依次降解纤维蛋白原的A 、S13、 纯化及部分性质研究。 链 ，该活性能被 EDTA、1，10一phenanthroline、EGTA完全抑 1 材料与方法 制，不受PMSF、SBTI的抑制。TMAC一1具有水肿活性和微弱 1．1 材料 烙铁头蛇毒产 自湖南省武陵山区；眼镜 的偶氮酪蛋白水解活性 ，没有精氨酸酯酶水解活性和皮下出 蛇毒因子 (cobravenomfactor，CVF)参照文献 制 血活性。结论 TMAC一1是一个非出血性的金属蛋 白酶，它 备；人微血管内皮细胞株HMEC由本实验室传代培 可通过酶切补体特定成分抑制补体激活。 养；DEAESephadexA-50凝胶、SephaerylS一100凝 胶、HitrapSPHP柱 (瑞典 AmershamPhannaciaBio- 关键词：蛇毒；抗补体蛋白；蛇毒金属蛋白酶；烙铁头蛇；纤维 tech公司)；兔抗绵羊红细胞抗体 (溶血素)、乙二醇 蛋白原水解酶；炎症；蛇伤 双(2一氨基乙醚)四乙酸[Ethyleneglycol—bis(B—amin- oethylether)一N，N，N ，N-tetraaceticacid，EGTA)]、 补体是人体重要的免疫防御系统，但过度激活