外源蛋白在大肠杆菌中表达定位策略.pdfVIP

生物工程进展》2001，v01．2l，No．6 广k ≮≯ 外源蛋白在大肠杆菌中的表达定位策略 一专一一论一 钟向阳 石歆莹 周宏灏 (中南大学湘雅医学院基础与临床药理研究所，中国湖南长沙410078) 摘要 外源基因在大肠杆茵中表达是对基因重组技术的成功应用。外源基因在不同的大肠杆菌 表达系统中表达产物可能定位于大肠杆茵空间结构的不同位置：胞质，胞质膜，胞周质，胞外膜和 胞外培养基，五种表达定位方式各有其特点和用途。 关键词 大肠杆茵 外源蛋白 表达定位 基因重组技术能从数量和质量上提供天然组织 生成以获取大量表达产物。 中难以得到的蛋白质等产物。以大肠杆菌为宿主的 外源基因在菌体内表达成有天然构象的蛋白， 体系是表达外源蛋白的首选体系，其遗传背景清楚、 需一系列蛋白因子辅助。包涵体形成可能主要与二 繁殖快、成本低、表达量高、易于操作。虽然人们开 类分子数量不足有关，也与蛋白折叠时环境条件密 发出了多种真核表达体系，以克服大肠杆菌含内毒 切相关旧1。 素、缺少翻译后修饰、高表达时易折叠错误等不足， 1．2蛋白肽链折叠与蛋白因子辅助 但尚不能完全取代大肠杆菌表达体系。大肠杆菌细 菌体内有二类分子参与肽链折叠： 胞学结构特点使表达的外源蛋白可能定位的五个位 分子伴侣是高度保守和分布广泛的蛋白，能帮 置是：胞质，胞质膜，胞周质，外膜和胞外培养基…。 助新生肽链折叠和转运，稳定蛋白质的未折叠状态 和中间折叠状态，防止分子内和分子间不合适的相 1表达的外源蛋白定位在胞内 互作用，但不直接参与二级结构的构成。大肠杆菌 将外源DNA或目的基因与表达载体构建成 DNA重组体，转化大肠杆菌后外源蛋白表达定位于 HtpG等‘2，3|。 胞内，是常见的表达方式。 折叠酶是另一类辅助蛋白，催化与折叠有关的 1．直接表达：即非融合蛋白表达。将外源基因插到 原核表达载体强启动子和有效sD序列下游，以外 源基因mRNA的AuG为起始翻译，表达产物位于胞 内，氨基端和羧基端不含其他蛋白或多肽序列。小 限速步骤的顺反式异构反应，使肽链折叠时脯氨酸 分子蛋白较易表达，产物接近天然蛋白，但易被水 残基由顺式变为反式幢1。 解，不稳定。当外源基因在大肠杆菌高效表达，特别 是表达出大分子蛋白时，则易在胞内形成包涵体。 菌中共表达或融合表达，以增加辅助蛋白肽链折叠 1．1包涵体的形成及利用 的分子，可以提高后者的折叠效率和可溶蛋白的产 包涵体是由蛋白肽链错误折叠形成的不溶于水 量，防止形成包涵体b。。 的非结晶性蛋白聚集体。通常一级结构正确，但其 不同蛋白质成熟途径不同，可能涉及不同的蛋 立体结构有误；无生物学活性或活性很低，需变性、 白因子对蛋白质折叠起作用。随着人们对折叠过程 复性才可能得到活性蛋白。包涵体的分离方法简单 和机制的更深了解，能使更多蛋白实现胞内表达。 (差别离心、洗涤等)，其形成可减轻外源蛋白对宿主 1．3蛋白肽链折叠与环境条件优化 的毒害，如果复性成本又较低，可考虑促进包涵体的 防止包涵体形成，最现实的办法是从培养和诱 导条件人手。如降低大肠杆菌生长温度以减少肽链 作者简介：钟向阳，男，博士。石歆莹，女，博士生。周宏灏，男， 间疏水表面相互作用，增加折叠成可溶性空间结构 教授，博士生导师。