云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素基因分子结构特征分析.pdfVIP

2010，26 (2) 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 101 文章编号 ：1002—2694(2010)02—0101—06 云南边境禽流感 H5N1亚型病毒血凝素 基因分子结构特征分析* 叶丛华 ，张文 东。，宋建领。，范泉水 ，张应 国 ，张富强 摘 要 ：目的 分析2003 2008年云南边境禽流感 H5N1亚型病毒血凝素 (HA)基 因分子结构特征 。方法 对 2003— 2008年在云南边境采集境外禽类样 品420份 ，做 H5／N1亚型特异性RTPCR及 多重 RTPCR检测 ，对 阳性样 品中H5N1病 毒 HA基 因进行 RT—PCR扩增 ，克 隆至pMD18-T载体测序 ，并与国内外 已知参考毒株序列进行 比对及系统发育分析 。结果 21份代表性病毒样 品HA裂解位点序列存在 4种不 同排列方式，均具有高致病性禽流感病毒分子结构特征 ；HA受体结合 位 点、糖基化位点及表位关键性氨基酸位 点存在变异；系统发育分析表 明可划分为5个不 同进化分枝 (1、2．4、2．3．2、2．3．4、 7)。结论 2003 2008年云南边境外 H5N1病毒间具有遗传差异，进化分枝 2．3．4毒株为 当地流行的优势毒株 ，不 同进化分 枝或 同一进化分枝不 同毒株 HA基 因存在变异。 关键词 ：禽流感病毒；H5N1亚型；血凝素 ；分子特征 ；进化分枝 中图分类号 ：S8553 文献标识码 ：A M olecularcharacteristicsofthehem agglutinin genesofavian influenzavirus subtypeH5N1in theboundaryregion ofYunnan province YEConghua，ZHANG W en—dong，SONG Jian—ling，FAN Quan—shui，ZHANG Ying—guo，ZHANG Fu—qiang (CentreforDiseaseControlandPrevention，ChengduMilitaryRegion，Kunming650032，China) ABSTRACT：Toelucidatethemolecularcharacteristicsofthehemagglutinin (HA)genesofH5N1subtypeofavianinfluen zavirusesintheboundaryregionofYunnanprovince．Of420sampleswerecollectedfrom theforeignpoultryinboundaryre gionofYunnanprovinceduring2003to2008andthesesamplesweresubjectedtoscreeningbyH5／N1subtype—specificand multiplexRT PCR．testing．TheHA genesofH 5N1virusesfrom positivesampleswereamplifiedbyRT PCR andcloned into vectorpMD18T forsubsequentsequencing．Thealignmentwith sequencesoftheknownreferencestrainsandphylogenetica— nalysiswerethenperformed．Thegenesfrom 21representativepositivesampleswith4differentsequencesatthecleavagesite wereobtainedandallofthem possessedthemolecularcharacteristicofhighlypathogenicavianinfluenzavirus．Themutationof keyaminoacidshadbeenfoundamongreceptor—bindingsites，potentialglycosylationsitesandneutralizingepitopes．Phyl