KRAB-相关蛋白1对胰腺癌细胞化疗耐药性的影响.pdfVIP

·12· ·胰腺外科· KRAB一相关蛋白1对胰腺癌细胞化疗 耐药性的影响 詹磊 江建新潘耀振孙诚谊 【摘要】 目的 观察KRAB．相关蛋白1(KAP．1)对胰腺癌capan一2细胞株化疗耐药的影响。 方法PCR扩增KAP-1序列，克隆至pGc．Fu一3FLAG—IREs-Pummycin慢病毒表达载体；双酶切及测 序鉴定正确后进行慢病毒包装并进行滴度检测。构建成功后感染人胰腺癌细胞株Capan．2细胞， 48 blot法检测KAP-1的表达量及 h后使用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT—qPcR)以及westem 其相关上皮一间充质转化(EMT)标志蛋白——波形蛋白的表达。采用细胞计数试剂盒(CCK．8)方法 测定不同化疗药物在不同浓度下过表达KAP．1的C印an-2细胞生长及化疗药物对胰腺癌细胞的生 长抑制作用。结果构建的慢病毒载体感染细胞48h后，在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光， 病毒滴度为2×108Tu／Inl。RT—qPcR检测结果表明，实验组、阴性对照组、空白对照组细胞中KAP一1 的mRNA相对表达量分