PRB与PIAS3相互作用及其功能研究.pdfVIP

摘 要 PRB与PIAS3的相互作用及其功能研究 摘 要 孕激素是一种甾体类激素，在细胞生长、增殖功能中发挥重要作用“’。孕激 素功能的发挥主要通过激素与细胞内特异的孕激素受体相互作用而产生，而孕激 素受体PR主要有两种亚型，即孕激素受体PRA和PRB。孕激素受体是一个结构相 似基因家族一核受体亚家族的成员，这个家族的蛋白都是配基激活转录调节子“’。 孕激素受体这两种亚型的不同主要在于PRB在其N端的Bus区包含一段164个氨 基酸的AF3区。一般来说，PRB存在于细胞浆中，在孕激素作用下，PRB会进入细 胞核发挥其转录活性。”。 PR和其他核受体的转录活性与蛋白的转录后共价修饰有关，它会影响到蛋白 质的结构和蛋白质与蛋白质之间的相互作用。这些修饰包括蛋白质的磷酸化“’、 ubiquitin—like【Ilodifierprotein)蛋白有关。一些重要的转录因子，比如GR、 激活酶一E1、E2、E3酶，SUMO化修饰会引起蛋白质亚细胞定位、稳定性或者是基 因的转录活性的改变。’。 本文结果显示，我们在用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察PRB的亚细胞定 位时发现，在PIAs3的存在下，即使加入孕激素，也有大部分PRB并不进入细胞 核。这提示在PRB与PIAs3之间可能存在某种功能上的相互作用。因此，我们在 入胚胎肾细胞293T中建立了一套PRB转录激活荧光报告测试系统，检测到PIAs3 对PRB转录激活活性有很强的抑制作用，并且这种抑制作用是孕激素依赖的。为 达载体上。实验证明PRB与PIAS3在酵母细胞中可以相互结合，并且我们找出PRB 与PIAs3相互作用的区域主要是PRB的DBD结构域。 为进一步确认PRB与PIAs3之间存在特异性的蛋白质相互作用，本文进行了体 外结合实验(』力P托，D：GST 得了与酵母中的发现相一致的实验结果。除此之外，本文还应用激光扫描共聚焦 摘 要 显微镜技术，在活细胞内验证了PRB和PIAs3存在特异性地相互作用。 PRB的SUMO化会抑制其转录活性，同时PIAS蛋白质家族的蛋白质大多可以作 PRB的多位点SUM0化有关，可以促进PRB多位点SⅢO化。 关键词：PRB，PIAs3，酵母双杂交 ThefunctioBandInteraction ofProteinInhibitorofActivated B STAT3(PIAS3)withProgesteroneReceptor Abstract Thesteroid rolesinnon_11al ho肌one， progesterone，playskey reproductive functions‘“，The ef兜cts aremediatedinteractionof也e phySi0109ical ofprogeSlemneby homlonewith intracellular astwo specmc progestemnereceptors(PRs)，expressed andPR—B。The aromembersof forms，PR—A a protein progeSteronerecep幻rs large of related knownasthenuclear I抽ily