HPLC法测定三氟柳片的含量.docVIP

HPLC法测定三氟柳片的含量 摘要：目的 采用HPLC法测定三氟柳片的含量。方法 色谱柱：氨丙硅基硅胶色谱柱4.6×250mm，流动相：乙腈—水（5.5：1），用磷酸二氢钾调pH至6.42，流速为1.1ml/min，检测波长：250nm。结果：三氟柳在31.44μg/ml～104.8μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9999，平均回收率为99.89%，RSD为0.43%。结果：所建立的方法专属性强、精密度好，结果准确。 关键词：三氟柳片；含量测定；高效液相色谱法 三氟柳是一种结构与水杨酸类似的抗血小板聚集药物，但并非由阿司匹林衍生而来。可供口服给药，作用机制是不可逆的抑血小板COX，同时，三氟柳和其代谢物HTB是cAMP磷酸二酯酶抑制剂，研究表明HTB也具有抗血小班聚集活性。疗效优于阿司匹林，而副作用比阿司匹林轻，可以取代乙酰水杨酸（阿司匹林）。 1 仪器与试药 1.1 仪器：岛津LC—10AT高效液项色谱仪，岛津SPD—10A紫外检测器，浙江大学N2000色谱工作站，氨丙硅基硅胶色谱柱4.6×250mm。 1.2试剂与样品：三氟柳片（由安徽华康医药科技开发有限责任公司提供）三氟柳对照品( 中国药品生物制品检定所 批号为 )，液相用甲醇为色谱 纯， 水为超纯水 2 方法与结果 2.1 溶液的制备 2.1.1 供试品溶液的配制 取三氟柳片20片， 精密称定，研细， 精密称取细粉适量（约相当于三氟柳70mg）置10ml量瓶中，加流动相至刻度，超声处理10分钟，用0.45um的滤膜过滤，取续滤液1.0ml置100ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为供试品溶液 2.1.2 对照品溶液的配制 精密称取经40℃真空干燥至恒重的三氟柳照品适量，流动相溶解 2.1.3 空白辅料溶液 按处方比例取一片的辅料细粉，置50ml量瓶中，加流动相至刻度，超声处理10分钟，用0.45um的滤膜过滤，滤液作为空白辅料溶液。 2.2 色谱条件 色谱柱：氨丙硅基硅胶色谱柱（4.6×250mm）；流动相：乙腈—水（用磷酸二氢钾调pH至6.42）（5.5：1）；流速：1.1ml/min；柱温：；检测波长：250nm；进样量：20μL。取供试品溶液、 对照品溶液、空 白溶液照上述色谱条件 ， 注入液相色谱仪， 记录色谱图至主成分峰保留时间的2-3倍， 色谱 图见图 1 。理论板数按三氟柳峰计算应不低于1500。； 三氟柳峰分离度符合要求。 2.3 线性试验 精密称取三氟柳对照品52.4mg，置10ml量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，摇匀；取1毫升置50ml容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，摇匀；分别吸取上述溶液各3.0，5.0，6.0，7.0，10.0ml置于10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，照高效液相色谱法250nm处测定。以峰面积为纵坐标( Y) ， 进样量为横坐标( x) 绘制标准 曲线 ， 回归方程Y＝10476×C+9396.8， r =0.9999 ( n =5 ) ， 结果表明， 安乃近进样量在测定浓度为31.44μg/ml～104.8μg/ml的范围内具有呈良好的线性关系。 2.4 精密度试验 取同一份供试 品溶液20μL， 注入液相色 谱仪， 连续进样 6次，三氟柳峰面积的 R S D为1.36%（数据过大，不得大于2%） 2.5 重复性试验 2.6 稳定性试验 取供试品溶液，照2．2项下的色谱条件，分别于0，3，6，9，12 h注入液相色谱仪测定，计算三氟柳峰面积的RSD为1.1％。 2.7 回收率试验 称取辅料适量 ， 按处方量 的 8 0 ％ ， 1 0 0 ％ ， 1 2 0 ％加入三氟柳 ， 依法测定含量 ， 含量平均值=99.89%，RSD=0.43% 2.8 三氟柳片含量测定 取 3 个不同号三氟柳片， 按“ 2 ． 1 ． 1” 项下方法制备供试品溶液， 取对照品溶液和供试品溶液分别在上述色谱条件进样 20 u l ， 按外标法 以峰面积计算样供试品含量。结果见表 1 。 批 号20040326 含量（%） 99.59 99.51 100.39 3 讨论