血涂片的制备.docVIP

实验二 血涂片的制备 Preparation of Blood Smear 实验原理 使用推片将血液在载玻片制成血膜。 试剂器材 载玻片（清洁、干燥、无尘、无油脂、25cm×75cm，厚度0.8mm~1.2mm）、推片。 操作步骤 （1）采血 静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端 1cm处加1滴（约0.05ml）抗凝血，如果使用手指采血则直接用洁净玻片蘸 1 滴血。 （2）推片 左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载玻片呈 30。~45。 角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片（图1-6），血涂片应呈舌状，头、体、尾清晰可见。 （3）干燥 将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。天气寒冷或潮湿时，应于 37 ℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。 （4）标记 在载玻片的一端用记号笔编号。 注意事项 1．要制备良好的血细胞涂片，玻片必须干净。新购置的载玻片常带有游离碱质，必须用约1mol/L HCl浸泡24h后，再用清水彻底冲洗，擦干后备用。用过的载玻片可放入含适量肥皂或其他洗涤剂的清水中煮沸20min，洗净，再用清水反复冲洗，蒸馏水最后浸洗后擦干备用。边缘破碎、玻面有划痕的玻片不能再用。使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。 2．最好使用非抗凝血制备血涂片，也可用EDTA抗凝血制备。使用抗凝血标本时，应充分混匀后再涂片。抗凝血标本应在采集后4h内制备血涂片，时间过长可引起中性粒细胞和单核细胞的形态学改变。制片前标本不宜冷藏。涂片的厚度、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及红细胞比容有关。一般认为血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。故针对不同病人应有的放矢，对血细胞比容高、血粘度高的病人应采用小血滴、小角度、慢推；而贫血患者则应采用大血滴、大角度、快推。 3．血膜应厚薄均匀适度，头尾及两侧有一定的空隙。如血膜面积太小，可观察的部分会受到局限，故应以在离开载玻片另一端 2cm的地方结束涂抹为宜。一些体积特大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此画线应注意保存血涂片尾部 细胞。 4．血涂片必须充分干燥后方可固定染色，否则细胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色过程中容易脱落。 实验评价 血涂片制备是血液学检查的重要基本技术之一。一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，并留有一定的空隙。 血涂片制备时手工推片法用血量少、操作简单，是最广泛应用的方法。除可获得满意的血涂片外，抗凝的血液病标本离心后取其灰白层涂片，可提高阳性检出率。此外，还可根据不同需要（如疟原虫、微丝蚴检查等）采用厚血涂片法。随着当今的自动化的发展，出现了自动血液涂片和染色装置。自动的血液涂抹装置主要有两类，一类是离心法，可以将少量细胞浓缩涂片；另一类是机械涂片法，其模拟手工涂片，适用于大量血涂片的制备。一般来说自动血液涂片装置可获得细胞分布均匀、形态完好的血片，但尚未普遍推广。 思考题 从外观来判断，一张好的血涂片有哪些特征？ 血涂片的制备与染色? 血涂片的制备:【器材】清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片(25㎜×75㎜,厚度为0.8～1.2㎜) .【操作】血涂片制备方法很多,目前临床实验室采用的是手工推片法,在玻片近一端1cm处.加一滴0.05ml充分混匀的血液,握住另一张边缘光滑的推片,以30°～45°角使血滴沿推片迅速散开,快速、平稳地推动推片至载玻片的另一端.【附注】1.血片通常分头、体、尾三部分.2.推好的血涂片应在空气中晃动,使其尽快干燥.天气寒冷或潮湿时,应于37恒温箱保温促干,以免细胞变形缩小.3.涂片的厚薄、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及红细胞的比容有关.一般认为血滴大、角度大、速度快则血膜厚；反之则血膜薄.4.涂片应在1h内染色或在1h 内用无水甲醇固定后染色.5.新购置的载玻片常带有游离碱质,必须用浓度约1mol∕LHCL浸泡24h后,再用清水彻底冲洗.血涂片染色:瑞士染色法【原理】?瑞士染色法使细胞既有化学亲和反应,有又物理吸附作用.各种细胞由于其化学成分不同,对酸性及碱性染料的结合力也不同,因此,染色后各种细胞呈现出各自的染色特点.【试剂】瑞士染液液: 瑞士染料?? 0.1g , 甲醇? 60.0ml瑞士燃料有酸性燃料伊红和碱性染料美蓝的氧化物(天青)组成.将瑞士染料放入清洁干燥研钵里,先加少量的甲醇,充分研磨使燃染料溶解,将已溶解的染料倒入棕色试剂瓶中,未溶解的在加少量甲醇研磨,直至染料完全溶解,甲醇全部用完为止.配好后放入室温下,一周后即可使