campetris利用HOCl自由基介导提高黄原胶量.docVIP

通过Xanthomonas campetris利用HOCl自由基介导提高黄原胶量 及其机制研究 Y. Manjula Rao, G. K. Sureshkumar Biochemical Engineering Group, Department of Chemical Engineering. Indian Institute of Technology, Bombay, Powai, Mumbai 400 076, India; telephone: 91-22-576-7208; fax: 91-22-572-3480; E-mail: gksuresh@che.iitb.ernet.in Received 6 September 1999; accepted 29 June 2000 （周鑫翻译） 摘 要：自由基介导已经被利用在生物反应生产中，特别是在Xanthomonas campestris生产黄原胶的产量和品质提高中体现的尤为突出。HOCl（氧化剂）处理带来了产量增长210%，产物黏度（品质）提高20%。另外，醋酸在产物中的质量比下降了42%，丙酮酸的质量比增加了63%。生长率几乎未受HOCl处理的影响。解释自由基介导的高产黄原胶的机制的假设也已提出。SoxS蛋白与gum基因的启动子结合提高mRNA的转录水平是这个假说的重要内容，并且得到了实验证实。? 2001 John Wiley Sons, Inc. Biotechnol Bioeng 72: 62–68, 2001 关键词：自由基；适应反应；Xanthomonas campestris；SoxS-DNA1. 简介 自由基可以用来调节一些重要的细胞周期，如细胞凋亡和癌变（Feig and Loeb, 1994; Feig et al., 1994; Okuno et al., 1998; Reid and Loeb,1993）。并且，自由基也通常被认为在温度、渗透压和营养水平起到了调节子的作用（Nagarathnamma et al., 1997; Osbourn et al., 1990），这些也是生物反应器中的重要环境参数。因此，自由基可以被认为在决定生物反应产量中有重要的角色。 氧自由基和氧分压是植物抵抗如Xanthomonas campestris这种植物病原微生物入侵的重要因子。黄原胶是由Xanthomonas campestris在入侵时分泌的，并且这种粘液（黄原胶液）的分泌程度与致病性直接相关（Thorene et al., 1987; Weiss et al., 1994）。从工业角度看，Xanthomonas campestris用来生产有商业价值的黄原胶，可以广泛利用于食品、医药、石油等其他行业（Lee, 1996）。如果自由基介导和黄原胶产量的关系可以阐明，就可以用来大大促进黄原胶的产量。并且，更深入的研究有利于改进通过培养过氧化氢酶分解过氧化氢实现原位供氧的培养方法（Sriram et al., 1998）。 我们通过加入自由基和研究菌体生长和黄原胶生产的反应，来调查自由基对生物反应器的反应影响。目的在于促进黄原胶产量。自由基促进生物反应产量没有在文献中报道过。此外，这种方法可以很简单的应用到工业生产中，只不过就是在接种到种子培养瓶之前处理若干小时。 在这次研究中，我们通过一种自由基形成剂（活性氧类，ROS）次氯酸（HOCl）进行胞外处理来实现氧化条件。就生长和黄原胶生产反面而言，对这种自由基产生剂的适应性反应（如随之产生的应答）已经被研究。同时，也提出了关于自由基刺激黄原胶过量生产的一种遗传学假说。假说中关于SoxS蛋白（一种自由基介导的调节蛋白）同DNA结合和高mRNA转录已经由实验证明。特异性的甲基化研究表明，SoxS同gumB基因启动子区域特定的GCAY序列结合。SoxS蛋白引起的由于gum基因的转录活性增加了的mRNA也被证明。 2. 材料与方法 2.1 培养物和其它特殊菌株 实验用微生物为生产黄原胶的Xanthomonas campestris（MTCC 2286，IMTECH，Chandigarh，India）。菌种保存在4℃，含有20g/L葡萄糖、10g/L酵母浸出物、10g/L CaCO3和20g/L琼脂的斜面上。生长培养基含有40g/L葡萄糖，3g/L酵母浸出物，5g/L K2HPO4，0.6g/L MgSO4·7H2O和0.4g/L尿素，用自来水溶解（提供痕量元素；培养基接种前不加入葡萄糖进行高压蒸汽灭菌）。 Escherichia coli XA 90（K-12），用来表达SoxS蛋白（Li and Demple，1994）和SoxS的抗体，由Prof. Demple（Harvard School of P