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实验二 细菌革兰氏染色.ppt
实验二 细菌革兰氏染色 一、实验目的 学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态 注意事项： （1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 （2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色 时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革 兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。 * * C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。 二、实验原理 革兰氏染色 1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染 2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。 3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。 4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色 三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—脱色—水洗—复染—水洗—干燥—镜检 四、实验方法 菌悬液 涂片 干燥 滴加无菌水 固定 取菌苔 涂片 Smear preparation Heat fixing crystal violet stain wash with water Staining Counterstain with Safranin 五、思考题 1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰氏阳性或阴性？ 2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性染料？ 3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色成败的关键一步是什么？ 4、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色技术和结果的正确性？
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