工业发酵菌种选育.pptVIP

* 自然界有些微生物在一定条件下产毒，将其作为生产菌种应十分当心，尤其与食品工业有关的菌种。 据规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。 * 性状要求 纯种 优良性状（生长快，营养要求粗放，发育早，产孢子多，已能积累少量产品或前体物） 对诱变剂敏感。 筛选目标 高产 生长速度快 产孢子多 消除某些色素或无意成分 能有效利用廉价发酵原材料 改善工艺中的某些缺陷（泡沫多、菌丝多、自溶早、过滤困难等） * 这一步骤的关键是制备单细胞和单孢子状态的、活力类似的菌悬液，为此要进行合适培养基的培养，并要离心，洗涤，过滤。 * 选用已知性状的供体和受体菌种作为亲本,因此不论在方向性还是自觉性方面,都比诱变育种前进了一大步； 但方法较复杂,存在两株以上亲株同时参与融合可能，工作进度较慢 * 诱发一个营养缺陷型（A—）、不能发酵乳糖、抗链霉素以及对噬菌体T l敏感的突变体； 再诱发一个营养缺陷型(B—)，能发酵乳糖、对链霉菌敏感和抗噬菌体T l的突变体； 这两个菌株各自都不能在基本培养基上生长。把浓度约105 /ml的上述两种菌混合并接种在基本培养基上，则长出少数菌落； 如果把上述两种菌分别接种到特制U型管两端,中间用一片可以使培养液流通,但不能使细菌通过的烧结玻璃隔开,则在基本培养基上就不会出现菌落。 这说明细胞接触是基因重组的必要条件，即细菌通过接合完成了杂交。 * 没有细胞壁； 细胞失去刚性，呈球形； 对渗透压敏感。 * 1、挑选典型菌种的优良纯种 2、尽量使用孢子、芽孢等休眠体 3、创造有利于休眠的环境（如干燥、低温、缺氧、缺乏营养、加保护剂等） 4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的菌株 * 这是一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的放线菌、霉菌及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的细菌如奈氏球菌、弧菌和假单胞杆菌及酵母则不适用。 其制作方法是，先将砂与土分别洗净、烘干、过筛(一般砂用60目筛，土用120目筛)，按砂与土的比例为(1～2)：1混匀，分装于小试管中，砂土的高度约1cm，以121℃蒸汽灭菌1～1.5h，间歇灭菌3次。50℃烘干后经检查无误后备用。也有只用砂或土作载体进行保藏的。需要保藏的菌株先用斜面培养基充分培养，再以无菌水制成108～1010个/ml菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置于干燥器中抽真空约2～4h，用火焰熔封管口(或用石蜡封口)，置于干燥器中，在室温或4℃冰箱内保藏，后者效果更好。 砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等诸条件，故保藏期较长、效果较好，且微生物移接方便，经济简便。它比石蜡油封藏法的保藏期长，约1～10年。中国科学院微生物研究所用砂土管保藏法保藏放线菌。 * 悬液保藏法 悬液法的基本原理是将微生物悬浮于不含养分的溶液如蒸馏水、0.25M磷酸缓冲液（Ph6.5）或生理盐水中保藏。适用于丝状真菌、酵母型真菌及细菌中的肠道菌科。大部分能保藏1年或更长。此法的关键是要用密封性能好的螺旋口试管或一般试管加橡皮塞以防止水分的蒸发。保藏在4℃、10℃或室温（18~20℃）。目前国内生产厂应用玉米发酵醪在冰箱中保种，接种时即将老的发酵醪接入新鲜玉米醪，经热处理后进行保温培养。  * 密封性能较好的螺旋口试管 * * (China Center for Type CultureCollection，简称CCTCC):CCTCC保藏的微生物包括细菌、放线菌、酵母菌、真菌、单细胞藻类、人和动物细胞系、转基因细胞、杂交瘤、原生动物，地衣，植物组织培养、植物种子、动植物病毒、噬菌体、质粒和基因文库等各类微生物（生物材料/菌种）。 / (Agricultural Culture Collection of China )：是中国国家级农业微生物菌种保藏管理专门机构。农业菌种中心设有液氮菌种保藏库、冷冻干燥菌种保藏库、矿油斜面菌种保藏库。编入中国农业菌种目录（2001 年第二版）的库藏菌种有 2490 株，包括：细菌、放线菌、丝状真菌、酵母菌和大型真菌（主要是食用菌），共166个属510种（亚种或变种）。 /CGMCC 普通微生物菌种保藏管理中心:CGMCC的宗旨是广泛收集国内外的微生物资源，妥善保存，以公开的保藏机构的名义为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供标准化的实验材料,在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为第三者能够自由地利用各种微生物材料提供服务，最大限度的实现微生物资源的保护、共享和持续利用。 AS-IV 中国科学院武汉病毒研究所-“中国病毒资源与信息中心”:是我国唯一从事普通病毒保藏与分类鉴定与研究的专业机构。该中心的