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微生物的实验室培养 第二课时——纯化大肠杆菌 微生物实验室培养（知识点总结） 配制培养基 ①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰； ③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。 平板划线接种 原理： 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操 作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 。 平板划线接种 平板划线接种 稀释涂布平板接种 原理： 将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度 菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。 当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成 的标准菌落。 稀释涂布平板接种 结果分析与评价 1、培养基制备成功的标准 菌种的保藏（了解） 1、临时保藏：适用于频繁使用的菌种。将菌种接种到固体斜面培养基，在适宜的温度下培养。当菌落长成后，将试管置于4℃的冰箱中保藏 2、甘油冷冻管保藏：适用于需长期保存的菌种。在3mL甘油瓶中，装入1mL甘油灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀，放-20℃的冷冻箱中保藏 纯化大肠杆菌（实验过程） * 复习题 1、甲、乙、丙是三种微生物，下表①、②、③是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在③中正常生长繁殖；甲能在①中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在②中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是： + + + + + + + + ③ + + + + - + + + ② + + + - + + + + ① CaCI2 0.5g MgSO4 9.25g H2O 100mL （NH）2SO4 0.4g 蔗糖 10g FeSO4 0.5g K2HPO4 4g 粉状硫 10g A、甲乙丙都是异养微生物 B 、甲乙都是自养微生物、丙是异养微生物 C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物 D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物 复习题 2、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是： ①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法 A、⑤③②①④⑥ B、①②③④⑤⑥ C、⑥②③④①⑤ D、③④②①⑥⑤ 三、纯化大肠杆菌 实验目的：接种大肠杆菌于培养基上，经过培养使其形成由单个细胞繁殖形成的子细胞群体，即菌落。 实验过程：(知识网络） 配制培养基 接种大肠杆菌 恒温培养箱中培养（12—24h） 结果分析与评价 计算→ 称量→ 溶化→ 灭菌→ 倒平板 调PH → 分装 → 包扎 菌种保藏 平板划线 稀释涂布平板 未接种的培养（对照组） 接种的培养（实验组） 培养基配制成功与否？ 接种操作成功与否？ 倒平板过程总结： Q1.培养基高压蒸汽灭菌后，需冷却到____℃左右时，才能倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？_____________________________________________________________ Q2.操作时锥形瓶口通过酒精灯火焰的目的是： _____________________________________________ Q3.将平板倒置的目的是： _________________________________________________________________________________________________________________________ Q4.在倒平板过程中，将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ _____________________________________________________________ 50 感觉锥形瓶的温度刚刚不烫手，就可以倒平板了 防止瓶口微生物污染培养基 既可以使培养基表面冷凝的水分更好的挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 不能，因为空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生。 配制培养基 灼烧接种环 冷却 划线 （第一区域） 蘸取菌液 灼烧接种环 冷却 划线 （第二区域） 灼烧接种环 冷却 划线 （第三区域） 灼烧接种环 冷却 划线 （第四区域） 灼烧接种环 冷却 划线 （第五区域） 灼烧接种环 平板倒置放置培养 平板划线接种 第一区域 第二区域 第三区域 第四区域 第五区域 Q2：每次划线前灼烧接种环的目的： Q3：划线结束后灼烧接种环的目的： 答案：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基 答案：杀死上次划线结束后残留的菌