03-6 紫外-可见分光光度法应用.pptVIP

1. 化合物本身无吸收，杂质有较强吸收 乙醇中含有杂质苯（256nm有吸收，说明含苯） 2. 化合物本身有吸收，可用ε来检验纯度 在λmax处测ε′max与文献中理论值εmax比较 芦丁含量测定：取样品3mg稀释至25mL。 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，则A值很大，将产生较大的误差，需采用差示法。 即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 a)图：X、Y组份的最大吸收波长不重迭，相互不干扰， 可以按两个单一组份处理。 b)和c)图：X、Y相互干扰 此时可通过解联立方程组求得X和Y的浓度： 其中，X、Y组份在波长?1和?2处的摩尔吸光系数?可由已知浓度的X、Y纯溶液测得。解上述方程组可求得cx及cy。 此方法需要解联立方程，不但手续繁杂，而且误差也大，对于浑浊试样或其他背景吸收较大的试样，如生物组织液等，由于成分复杂和化学不均匀性，又存在很强的散射，一般很难找到合适的参比溶液来抵消影响。20年代初提出来双波长分光光度法。 组分增多，实验的误差将增大。 根据吸光度加合性，有 A1=A样1 + AS1 A2 =A样2+ AS2 ?A=( A2- A1)=(?2-?1) cb 试样的吸光度差与待测物质的浓度成正比，与背景吸收和散射光无关，即背景和散射光得到校正。 （三）双波长法分光光度