藻类生长抑制实验new.pptVIP

实验一 藻类生长抑制实验 实验目的和意义 实验目的 了解藻类的生长规律 掌握藻类的培养方法 掌握化学物质对单细胞绿藻生长影响的评价方法 意义 藻类是水体中的初级生产者,藻类的死亡影响次级生产者如浮游动物和鱼类等的生存,进而对整个水生生态系统产生破坏。因此考察污染物对藻类生长的抑制，有助于了解污染物对水生生态系统的污染效应。单细胞藻类世代时间短，可在短期内获得化学物质对其许多世代及种群水平上的影响。 实验原理 将不同浓度的受试化合物加到处于对数生长期的藻类中，在规定的实验条件下继续培养，每隔24h测定藻类种群的浓度或生物量，以观察受试化合物对藻类生长的抑制作用。显著低于对照的生长率表明藻类生长受到抑制。 1. 受试化合物 用于研究藻类生长抑制实验的受试化合物应当是挥发性低、环境稳定性好且可溶于水的物质。如果需要助溶剂，它在水中的浓度不能超过0.1mL/L。 本实验所用受试物为对硝基酚。该化合物对皮肤有强烈刺激作用。能经皮肤和呼吸道吸收。动物实验可引起高铁血红蛋白血症，体温升高，肝肾损害。急性毒性：LD50250mg/kg(大鼠经口)；467mg/kg(小鼠经口)。 2. 藻种 本实验中使用藻种为斜生栅藻。 3. 培养基 栅藻可用“水生4号”培养基培养。 仪器与试剂 培养基的配制： 配制营养基时可将营养盐类按所需浓度直接加入无菌蒸馏水或去离子水中。应按顺序逐个加入，待一种盐类完全溶解后再加另外一种。亦可先配制各种营养盐类溶液，经灭菌后避光冷藏。 “水生4号”培养基 营养盐 含量/(g/L) 营养盐 含量(g/L) (NH4)2SO4 0.200 MgSO4·7H2O 0.080 Ca(H2PO4)2·H2O 0.030 FeCl3(1%) 0.015 NaHCO3 0.100 土壤浸出液 0.500 KCl 0.025 水 1000 实验步骤 1. 藻类培养 光照培养箱中培养。培养温度为24 ±2 ℃；光照强度4000 ±400lx；培养容器用棉塞封闭。 2. 受试液的配制(污染物质) 设置至少5个构成对数间距系列的浓度，浓度比不超过2.2。本实验中设置7个浓度。 3. 测试液的配制 先在每个锥形瓶中用高压灭菌过的量筒加入10mL藻试液，再用另一支高压灭菌过的量筒加入10mL受试液。对照组只加10mL培养液。将各瓶摇动均匀后，放入培养箱中培养。每隔24h测定各组藻类的细胞计数。 血球计数板的使用 计数区由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将藻悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让藻悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余藻悬液。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的藻数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。数上线不数下线，数左线不数右线。 数据处理 1. 藻类生长的测定 藻类生长是指实验期间每毫升溶液中藻类细胞数目的增加量。一般用三种方法测定： ①细胞计数；②测光密度；③测叶绿素含量。本实验采用细胞计数法。 2. 数据处理 生长率是单位时间内藻类细胞增长的量。对数生长期的藻类平均生长率可用下式计算（）： μ＝(lnNt－lnN0)/t μ——藻类平均生长率； t——藻类培养时间； N——藻类细胞生长量，N0为起始细胞数，Nt为培养时间t后的细胞数。 实验记录表 培养时间(d) 0 1 2 3 4 5 6 7 藻细胞浓度(个/mL) 数据处理 对数生长期藻细胞浓度生长规律： N=N0×2n 其中N为细胞最终数目； N0为细胞初始数目； n为指数生长期细胞繁殖代数。 数据处理 细胞每分裂一次所需要的时间称为代时，以G表示，若培养时间为t，则：n=t/G。 上式可表示为： Nt=N0×2（t/G） 其中： Nt为培养时间t后的细胞浓度； N0为初始细胞浓度； t为培养时间。 数据处理 两边取对数，则 lnNt=lnN0+t/G × ln2 对于某一特定系统，G