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Cytc的制备及测定 一、目的要求 １、通过cyt.C 的制备，了解蛋白质制品制备的一般原理和步骤。 ２、掌握制备cyt.C的操作技术及含量测定方法。 细胞色素c（cyt.c） 它是电子传递链中一个独立的蛋白质电子载体，位于线粒体内膜外表，属于膜周蛋白，易溶于水。它与细胞色素c1含有相同的辅基，但是蛋白组成则有所不同。在电子传递过程中，cyt.c通过Fe3+ ? Fe2+ 的互变起电子传递中间体作用。 细胞色素c（cyt.c） 二、实验原理 cyt.C存在于线粒体中，心肌和酵母细胞中含量丰富。 含铁卟啉的结合蛋白质，分子量约为13000；蛋白质部分由104个左右的氨基酸残基组成，赖氨酸含量较高，pI≈10.7。 是一种稳定的可溶性蛋白，它易溶于水及酸性溶液，故常用酸性水提取。 分氧化型和还原型两种，氧化型水溶液呈深红色，还原型呈桃红色。 对热较稳定，不易变性。 二、实验原理 氧化型cyt.C在550nm下摩尔吸收系数为0.9×10４， 还原型cyt.C为2.77×10４。根据已知的摩尔吸收系数，可用分光光度法测定cyt.C的含量。 摩尔吸收系数（ε）：是指物质在 1mol/L 的浓度下，比色杯厚度为 1cm 时的吸光度。 　　　ε＝ Ａ／ＣＬ 　　　　Ａ：吸光度 　　　　Ｃ：每升溶液中物质的摩尔数 　　　　Ｌ：比色杯内径 二、实验原理 以新鲜猪心为原料，经过酸溶液提取，