5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA） ELISA试剂盒.docVIP

5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA） ELISA试剂盒 （德国IBL：RE59131） 1、应用范围 此ELISA试剂盒可用于人尿液中5-HIAA的体外定量检测。 2、前言 原发性类癌瘤通常都源自中肠的肠嗜铬细胞，并且大多情况都位于回肠末端中。类癌瘤通常都会分泌各种各样的吲哚，此类肿瘤的一般都明显的表现为尿液5-HIAA（五羟色胺的最终代谢产物）的分泌量升高。5-HIAA传统的检测方法是通过亚硝基萘酚的重氮化作用产生紫色。然而，人们已证明很多存在于尿液中的其它物质会干扰此反应而出现假阳性结果。人们也尝试着通过将离子交换层析和荧光分析相结合的方法来克服此问题。但这些方法灵敏度低并且耗费时间。最近，有人也介绍使用下列方法来检测5-HIAA：紫外区域5-HIAA的高效液相层析与荧光分析（或电化学分析）相结合的方法。因为尿液中存在着各种各样的干扰复合物，所以这两种方法都要求进行溶剂提取。而5-HIAA的酶联免疫检测是用于尿液中类肿瘤综合征标记物定量检测的一种全新的、简单的方法。 3、实验原理 此ELISA试剂盒利用的是竞争法原理，生物素标记抗原和未用生物素标记抗原竞争结合一定量的抗体结合位点。结合到抗体上生物素标记抗原的量与样品中被分析物的浓度成反比。反应系统达到平衡后，未结合的生物素标记的抗原用洗涤液洗去。结合了生物素标记抗原的抗体的量的测定是以抗生物素碱性磷酸酶作为标记物，以PNPP(对硝基苯酚磷酸盐)作为底物液。将未知物的酶反应活性和已知标准品的反应曲线相比较，可以得到未知物的量。 4、试剂盒成分 数量 标志 成分 1×12×8 MTP 包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，单克隆）。 1×5ml ANTISERUM 5-HIAA 抗血清 蓝色，即用，内含：抗血清（兔），磷酸缓冲液，稳定剂。 1×5ml BIOTIN 5-HIAA 生物素 即用，蓝色，内含：磷酸缓冲液，稳定剂。 1×0.2mL ENZCONJ CONC 酶联物 浓缩型（100×） 内含：碱性磷酸酶标记的抗生物素抗体（羊），Tris缓冲液，稳定剂 1×7×0.5ml CAL A-G 标准品A-G 0; 0.4; 1.0; 2.75; 7.5; 20; 55 mg/L 0; 2.1; 5.25; 14.4; 39.4; 105; 288 μmol/L 即用,内含:5-HIAA（甲基化）,稳定剂。 1×2×0.5ml CONTROL 1+2 LYO 质控品1+2，冻干粉，内含：人尿液（正常与非正常人的尿液），具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签. 1×2ml METHYLRAGE 甲基化试剂，黄色，即用，内含二氯甲烷 1 x 1 mL HCL HCl，即用，0.1M的HCl 1 x50ml ASSAUBUF CONC 检测缓冲液，浓缩（10 x） 内含：磷酸缓冲液，BSA，稳定剂 1 x4ml DILREAG 稀释液，即用，内含：N,N-二甲基甲酰氨 1 x50ml WAHSBUF CONC 洗涤液，浓缩（20 x） 内含：磷酸缓冲液，吐温，稳定剂 1×9 PNPP SUBS PNPP底物片，内含：对硝基苯磷酸（PNPP） 1×27ml PNPP BUF PNPP底物缓冲液，即用，内含：二乙醇胺，水， 1×15ml PNPP STOP PNPP终止液，即用，内含：1M的NaOH，0.25M的EDTA 3× FOIL 粘性金属板 5、实验所需器材（但试剂盒不提供） 移液器（20；25；50；100；1000μL） 玻璃检测用试管（12×75mm） 旋涡混合器 带储器的8通道移液器 洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统 酶标仪 双蒸水或去离子水 通风橱 吸水纸，取样吸头，计时器 6、实验前的准备说明 供手动操作和自动操作用： 注意 此96人份的检测试剂可分成3次独立的实验进行。下列体积为用四条包被板（32人份）进行一次检测所需要的试剂的量。如果客户想将标准品的量由7个减为6个，您可去掉标准品G。则实验结果的报告范围相应的减少到3000μg/L 6.1冻干粉或浓缩成分的制备 稀释 成分 稀释液 比例 备注 贮存 稳定性 15ml 检测缓冲液 150ml 双蒸水 1；10 充分混合 2-8℃ 2周 炙控品 0.5ml 0.1M的HCl 静置15min，混合时避免气泡 ≤-20℃ 8周 15ml 洗涤液 300ml 双蒸水 1：20 加热至37℃以溶解所有的晶体（如果有必要），充分溶解。 2-8℃ 4周 60μL 酶联物 60ml 检测缓冲液(已稀释好) 1：101 临时配置，仅能使用一次，混合时避免气泡产生 18-25℃ 30min 3 PNPP底物片 8ml PNPP底物液缓冲液 临时配置，仅能使用一次,混合时必免气泡产生