鸡新城疫病毒感染性核酸免疫抗原、抗体与N基因的检测.pdfVIP

参考文献 [1]郭宏，郭巨恩，计成饲料研究与环境保护．中国饲料，1999．24(19) [2]袁建敏，呙于明．生物技术对提高饲料利用串降低环境枵染的应用，1997，18(1) [3]凌云．中药蒲公英的质量标准研究．中草药，1999，30(12) [43凌云，郑俊华．中药蒲公英的研究进展．中国现代应用药学，1998，15(3) [5]阮桂施．SAS统计分析实用大全．北京：清华大学出版社，2003 作者简介 郭东新，男，1968年11月生，1991年毕业于北京农业大学，学士，现在沈阳农业太学盲牧兽医学院动物营养教研室 工作，讲师。 江菌托崔丽李风华康丽娟 (大连三仪生物工程研究所大连市兽医卫生防瘦站) blot 和Southern blot和Southern ELISA血清效价仅为1：16；Westernblot分别可自多个组织脏器中检测到NDV抗原及N 基因。 [关键词]鸡新城疫病毒感染性核酸抗原抗体基因 鸡新城疫仍为困扰养禽业发展的重要传染病之一，常规疫苗的免疫失败和大量中等毒力活疫苗的频繁 使用造成强大的免疫压力，是新城疫难以控制的一个重要原因。在新城疫病毒(NDV)的复制过程中， 病毒首先吸附在细胞受体上，受HN多肽调节，由F蛋白完成病毒与细胞的融合，核衣壳复合物进入细 作用下产生互补的正链，它相当于mRNA，并利用细胞的机制，翻译出病毒蛋白质和基因组。NDVF蛋 白为无活性前体蛋白FO，必须分解成F1和F2两个亚单位后，方能引起宿主细胞融合和分解，而这种分 解作用需要宿主本身的蛋白酶系统完成。为探讨体外给予的NDV全基因组RNA能否在某种特定的活性 蛋白酶的作用下在机体内完成完整NDV粒子的合成和包装，特设计并进行本实验，通过对NDV抗体、 抗原和N基因的检测进一步证实。 1_材料与方法 (1)NDV 所提供。 1312 (2)NDV阳性血清由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供。 (3)NDVN基因地高辛标记的核酸探针由兽医生物技术国家重点实验室曹殿军博士提供。 (4)按常规方法将NDV 绒毛尿囊液。 (5)差速离，L,／密度梯度离心纯化病毒备用。 证RNA的完整性。 (7)DEAE纤维素柱层析去除杂蛋白和RNA碎片。 (8)按经验试验量配制活性蛋白酶，保证本制剂经口服途径给予机体后，除胃蛋白酶消化的部分之外 有足够的含量人机体细胞。 组鸡血清及肝、脾、肾、法氏囊等十多种组织脏器冻存备用。 blot 检测试验组鸡不同脏器的NDV抗原；用地高辛标记的NDVN基因核酸探针Southernblot分子杂交检测试 验组鸡不同脏器的NDVN基因。 2．试验结果 (1)NDV感染性核酸进入机体后可产生互补的正链，并利用机体细胞的机制，翻译出病毒蛋白质和 基因组，组装成完整的NDV粒子。感染性核酸进入机体后120h可产生病毒特异的血清抗体，但抗体水 平较低，Dot—El，ISA检测抗体的水平仪有1：16。 (2)体外给予适当的活性蛋白酶可加快NDV感染性核酸进入机体后产生互补的正链，利用机体细胞 的机制，翻译出病毒蛋白质和基因组并组装成完整的NDV粒子的速度；检测结果为NDV感染性核酸注 可达1：1024。 (3)Westemblot和Southern blot的检测结果证明感染性核酸进入机体后24h，在特定活性蛋白酶的作 用下120h之后可分别在多个组织脏器中检测到NDV抗原及N基因。 Westem (g)Dot—ELISAblot和Southern 染性核酸完全可在机体内合成完整的病毒粒子。这种病毒粒子在特异活性蛋白酶的裂解作用下可迅速复制 并刺激机体产生病毒特异的血清抗体。 3．讨论 与基因工程疫苗的研究思路绝然不同，采用感染性基因组或cDNA预防和治疗家禽病毒性疾病将会是 禽病领域又一新的研究天地。 部分家禽病毒的基因组或其cDNA具有