基因工程,调控等两次.docVIP

基因组：指细胞中一套完整单倍体的遗传物质的总和。 基因：核酸分子中储存遗传信息的遗传单位。是指贮存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息以及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。 cDNA文库：指由mRNA转录，通过逆转录酶生成cDNA，通过互补链生成新的双链DNA，同相应的载体重组、克隆，所产生的克隆群体代表了所有DNA的序列(genomic DNA library)指将基因组DNA通过限制性内切酶部分酶解后所产生的基因组DNA片段随机的同相应的载体重组、克隆，所产生的克隆群体代表了基因组DNA所有的序列 目的基因：为基础研究和应用研究的需要而分离获得的某一感兴趣的基因（DNA序列），或者是为得到某一感兴趣的蛋白质或RNA所对应的DNA序列。有两种类型，既cDNA和基因组DNA。 基因工程：在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组，将重组DNA分子导入合适的受体细胞中，使重组基因在宿主细胞中得到扩增和表达。 载体：在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和细菌病毒和动植物病毒。DNA序列并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。 1、重组DNA技术（基因工程）的基本过程： 答：制备目的基因和相关载体。 将目的基因和有关载体进行连接。 将重组的DNA导入受体细胞。 DNA重组体的筛选和鉴定。 DNA重组体的扩增表达。 2、什么是载体，，常用载体有哪些？ 答：载体三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和细菌病毒和动植物病毒 1）载体必须是复制子，在宿主细胞中能大量复制。 （2）同一限制性核酸内切酶在载体上只有单一酶切位点。 （3）具有选择性遗传标记。 （4）具有较多的拷贝数 （5）分子量相对较小，有足够的接纳目的基因的容量 （6）具有较高的遗传稳定性 3、目的基因的获取方法，试简述一种。 （1）化学合成法，已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 （2）基因组DNA文库(genomic DNA library)，将基因组DNA经内切酶消化后插入载体，得到含有不同插入片段载体，这种克隆载体混合物应该含有不同基因组片段，此即基因文库。 （3）cDNA文库(cDNA library) 将细胞所有mRNA逆转录成cDNA片段，克隆到适当的载体中，构建成含有不同cDNA片段的克隆载体混合物，此即cDNA文库。 （4）聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR) 二． 1、基因表达的时间特异性(temporal specificity)：按功能需要，某一特定基因的表达严格按特定的时间顺序发生，称之为基因表达的时间特异性(temporal specificity)。多细胞生物基因表达的时间特异性又称阶段特异性(stage specificity)。 2、基因表达的空间特异性(spatial specificity)：在个体生长全过程，某种基因产物在个体按不同组织空间顺序出现，称之为基因表达的空间特异性(spatial specificity)。基因表达伴随时间顺序所表现出的这种分布差异，实际上是由细胞在器官的分布决定的，所以空间特异性又称细胞或组织特异性(cell or tissue specificity)。 3、管家基因(housekeeping gene):某些基因在一个个体的几乎所有细胞中持续表达，通常被称为管家基因(housekeeping gene)。 4、操纵子(operon) : 原核生物中功能相关的基因成簇地串联、密集于染色体上，共同组成一个转录单位——操纵子。 5、启动子：位于结构基因上游并为RNA聚合酶识别、结合和启动转录的DNA序列，称为启动子。 6、衰减子（attenuator)是位于一些操纵子中第一个结构基因之前，通过减弱转录作用，控制转录水平的一段特殊碱基序列。 7、单顺反子(monocistron) ：即一个编码基因转录生成一个mRNA分子，经翻译生成一条多肽链。 8、增强子：指远离转录起始点、决定基因的时间、空间特异性、增强启动子转录活性的DNA序列。其发挥作用的方式通常与方向、距离无关。 9、沉默子(silencer)：某些基因的负性调节元件，当其结合特异蛋白因子时，对基因转录起阻遏作用。 10、反式作用因子（trans-acting?factor）又称为分子间作用因子，指被顺式作用元件特异识别和结合的一些与基因表达调控有关的蛋白质因子。真核生物转录因子通常属于反式作用因子。 11、顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列。包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。 β-半乳糖苷酶催