ECD+%26+CAD裂解方式FT-ICR-MS研究.pdfVIP

第27卷增刊 分析测试学报 v01．27 FENXICESHI ofInstrumental 2008年11月 XUEBAO(Journal Nov．2008 Analysis) C ECDCAD裂解方式的FT—I R—MS研究 石 磊，程舸，于 雷，刘晓梅，王韶 (吉林大学公共卫生学院，吉林长春130021) transformion resonancemass 傅立叶变换离子回旋共振质谱(Fourier cyclotron 000 Ms具有超高分辨率、超高灵敏度(fm01)，以及较宽的质量范围(m／z10U)。多级质谱功能与肽 库配合越来越广泛地应用到生物大分子的研究中¨。1，已经成为生命科学相关前沿领域如蛋白质组研 究不可缺少的工具之一。 迄今为止，蛋白质组学研究策略主要有“Bottom Up”和“TopDown”2种方法。“TopDown”是 在蛋白水平上鉴定和研究蛋白质，将完整的蛋白质分子离子有效地解离以获得蛋白质翻译和翻译后修 饰等结构信息[3J。而“Bottom Up”是在多肽水平上鉴定和研究蛋白质，将蛋白质酶解成多肽片段后再 activated 进行分析。丌一ICR—Ms具有多重独特的裂解技术，如碰撞活化解离(collisionaldissociation． CAD)，以及电子捕获解离(electron capture 键，而且还可以进行修饰后定位H-6】。根据多肽碎片命名规则并结合ECD和CAD两种解离方式断裂机 理上的互补性规律，能够提高对蛋白质酶解片段裂解机理鉴定的可信度”‘3]，从而可以更好地进行蛋 白质修饰后位点和修饰结构的确定。 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 T 超高速离心机(美国AlfaWassermann公司)，傅立叶变换离子回旋共振质谱仪(7．0FT—ICR— LTQ MS)(Finnigan 檬酸铵、尿素、DDT、TFA、、碘化乙酰胺、乙腈(Sigma公司)。 1．2质谱测定 cm 蛋白质样品经酶解后，将多肽样品置于96孔板自动进样系统中，利用配有Nano．spray技术(15 长的Proxeonnano-ESI发射器，填充物为直径是3 pm的c，。树脂)的高分辨傅立叶变换离子回旋共振质 谱仪，测定样品的质谱图。 2结果与讨论 电喷雾离子化技术(electrospray 质荷比的准确性对测定结果有很大影响，订一ICR—MS由于具有极高的灵敏度和分辨率，减少了对样 品纯度和检测量的限制。采用“Bottom 2)，借助先进的Mascot软件数据库进行质谱分析，可以获得相关蛋白质多肽片段的结构信息，从而提 高对蛋白质酶解片段质谱裂解机理确认的准确性。 基金项目：吉林省科技厅白求恩医学专项(200705391) 一53— 第27卷