犬膀胱移行上皮细胞的体外连续培养及生物学特征观察.pdfVIP

, 2007, . 21, . 11 12·38 · Ch inese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery N ovem ber V o l N o 犬膀胱移行上皮细胞的体外连续培养及生物学特征观察 韩平　杨志明　李秀群　王杨　罗静聪　解慧琪 　　【摘　要】　　 目的　探讨犬膀胱移行上皮细胞体外连续培养和纯化方法, 为进一步构建组织工程尿路上皮组织提 供实验依据。　方法　无菌获取幼犬膀胱组织, 0125% 胰蛋白酶消化获取单细胞悬液, 于上皮细胞无血清培养基中培 养。采用0 05% 胰蛋白酶和0 02% ED TA 消化、纯化细胞, 动态观察细胞形态变化和增殖情况,M T T 法绘制生长曲线; 透射电镜观察细胞超微结构; SABC 法对培养的细胞进行免疫组织化学鉴定; 并采用流式细胞仪检测不同代次细胞的细 胞周期和倍体水平。　结果　采用酶消化法能从4～ 6 2 ( ) 6 cm 的膀胱黏膜组织中分离获取 1～ 5 ×10 个细胞。原代培养接 种24 后可见大量细胞贴壁, 第7 天细胞生长融合达80%～ 90% , 细胞排列呈典型的铺路石样。 法测定第3 代细胞 h M T T 在传代培养7 d 生长达高峰; 传代并纯化的细胞纯度高, 无成纤维细胞污染, 至第4～ 6 代细胞仍保持良好形态。透射电镜 下, 可见上皮细胞特征性张力微丝和细胞间桥粒连接。细胞角蛋白 1 3 免疫组织化学染色, 胞浆呈棕黄色阳性反 A E A E 应。不同代次细胞均为二倍体细胞。　结论　酶消化法能从较少的膀胱组织中分离获取足量、较纯的膀胱移行上皮细胞, 细胞在无血清培养基中能连续传代扩增, 可以满足进一步构建组织工程尿路上皮组织的需要。 【关键词】　　膀胱移行上皮细胞　　细胞培养　　生物学特征　　犬 中图分类号: 813　 318　　文献标识码: Q R A EXPER IM ENTAL STUDY ON CHARACTER IZATION OF NORM AL CAN INE BLADD ER TRANSITIONAL , , , . EP ITHEL IAL CELL S CUL TURED IN V ITRO H A N P ing YA N G Z h im ing L I X iuqun et al D iv ision of S tem Cell and T issue E ng ineering , S tate K ey L aboratory of B iotherapy , W est Ch in