产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定与抑菌活性研究.pdfVIP

农业科学与环境保护 参考文献 [1】付毅慧．对发展沈阳林下经济实现农民增收的建议【M】．辽宁民族出版社，2006 【2】黄世仪．鸡鸭鹅饲养新技术【M】．金盾出版社，2007． 【3】宫喜臣药用植物规范化栽培，2006． 作者简介 王宇，男，197耻眵月出生，毕业于沈阳航空工业学院环境设计专业，学士学位，沈阳市退耕还林工程管理中心 工程师。 马丽娜，女，1981年11月出生，毕业于吉林农业大学农学专业，沈阳市退耕还林工程管理中心，助理工程师。 产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑茵活性研究 马镝 (沈阳农业大学邮编110161) 摘要：采用透明圈法，通过大量筛选得到9株产壳聚糖酶的野生茵株，对其中产壳聚糖酶酶活最高的茵株 6S BS一0409的茵株形态特征和生理生化特征及1rDNA序列进行了测定分析，并对该茵所产壳聚糖酶进行了抑茵实 6s 验比较，结果表明，该菌株杆形，革兰氏染色阴性，极生鞭毛。经1 rDNA序列分析表明，BS-04091苟株为巨大 芽孢杆菌且Bs—0409茵株的发酵液对多种病原真菌都有较强的抑制作用。 ‘ 关键词：芽孢杆茵；壳聚糖酶；筛选和鉴定；抑茵活性 壳聚糖由氨基葡萄糖通过声一1，4-糖苷键连接而成，其水解产物壳寡糖具有独特的生理活性和功能”】， 如抗细菌口1、抗真菌和抑制肿瘤的生长等，因此在医药、保健品、农业、食品方面具有广泛的应用前景 p叫】。目前，制备壳寡糖的方法主要有化学降解法和酶解法，化学法降解寡糖得率低，产物分离困难，而 且对环境污染严重。而酶解法具有反应条件温和，寡糖得率高，不造成环境污染等优点，是今后发展的 方向。降解壳聚糖的酶有非专一性酶和专一性酶，非专一性酶主要包括蛋白酶，脂肪酶等，作用机制尚 性，酶解产物主要为2—6聚合度的壳寡糖。本研究室对产壳聚糖酶的细菌进行了筛选，其中BS一0409菌株 酶活较高，本文对BS-0409菌株进行了鉴定及其发酵液对病原菌的抑制作用等方面的研究。 1．材料与方法 1．1材料 1．1．1土样 采白长白山土壤，共收集15份样品，采集后自然晾干后置于4cc冰箱保存。 1．1．2培养基 富集培养基： 平板分离培养基：壳聚糖5．09，KH：PO．2．29，Na2HPO．·12H：O 1．09，(NH．)：SO。o．89， NaN031．09，MgSO。。7H200．Sg，CaCl20．019，KCl 共1000mL，壳聚糖溶液应事先调至pH6．0，并与其他成分分开灭菌，然后混合。 343 科学发展与社会责任 斜面培养基：蛋白胨2％，酵母膏1％，葡萄糖2％，琼)1h2％，pH自然。 复筛摇瓶培养基：平板分离培养基中不加琼脂，另外加入o．s％葡萄糖，其他相同。 1．2方法 1．2．1 1，(蜕(w／v)肢体壳聚糖的制备参照Yabuki方法‘圳进行。 1．2．2壳聚糖酶活力测定 参照Yaslls}liUchida，etal的方法罔测定，以每分钟释放出l岬01的葡萄糖胺的酶量为1个酶活单位。 1．2．3土壤产壳聚糖酶菌株的筛选 1．2．3．1富集培养 取各个土样各约9克，置于加有100ml无菌水和玻璃珠的三角瓶中，30。C振荡(180r／rain)30min，使 样品充分打敌后，放置令沉淀，取上清液约5ml，加入到事先灭过菌的富集培养基中，28。C摇瓶富集培养 3d。 1．2．3．2菌株分离 以壳聚糖为唯一碳源，用稀释平板法分离富集后的样品。于30R2培养箱中培养4—5d，然后选择在培 养基上形成的透明圈直径与菌落直径的比值较大