生物技术制药第五章动物细胞制药.pptVIP

二、动物细胞的培养条件 1.器材的清洗（如器材上残留的物质和油污会影响细胞的贴壁） 一般需经浸泡、刷洗、泡酸和冲洗四步清洗过程 2.器材的消毒灭菌（表5-4） 3.水质（如微量的有毒元素、过量的金属离子等） 4.pH值 应在7.2~7.4；高于7.6或低于6.8都会影响细胞生长 5.渗透压 一般通过增减NaCl的方法调节渗透压 6.温度 动物细胞（特别是哺乳动物细胞）最佳培养温度37±0.5℃；昆虫细胞应为27℃ 7.空气 通过搅拌等方法使培养液溶入适量氧 三、动物培养基的种类和组成 天然培养基 合成培养基 无血清培养基 1.天然培养基 有血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸液、羊水、腹水 由于该类培养基成分复杂，组分不稳定，来源有限，因此不适合大量培养和生产的需要 组成稳定、可大量生产供应。成分为氨基酸（细胞合成蛋白质的原料）、维生素（维持细胞生命活动的低分子活性物质，形成酶的辅基或辅酶）、糖类（碳源）、无机盐（保持细胞的渗透压并参与代谢）、其他（前体和氧化还原剂） 合成培养基中除了各种营养成分外，还需添加5%-10%的小牛血清，才能使细胞很好地增殖 添加小牛血清的作用： ①提供有利于细胞生长增殖所需的各种生长因子和激素 ②提供有利于细胞贴壁所需的贴附因子和伸展因子 ③提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结合蛋白 ④提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素 2.合成培养基（表5-7） 3.无血清培养基 优点：①提高了细胞培养的可重复性，避免了血清差异所带来的细胞差异 ②减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险 ③供应充足、稳定 ④细胞产品易于纯化 ⑤避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性 ⑥减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰，便于结果分析 无血清培养基在天然或合成培养基的基础上添加激素、生长因子、结合蛋白、贴附和伸展因子及其他元素 第五节 动物细胞培养方式和操作方式 一、动物细胞的大规模培养方法 （一）培养方法分类 1.根据培养细胞可分为：原代细胞培养和传代细胞培养 2.根据培养容器和方式可分为：静止培养、旋转培养、搅拌培养、微载 体培养、中空纤维培养、固定床和流化床培养 3.实际生产可分为：悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养 1.悬浮培养 适用条件：非贴壁依赖性细胞 优点：操作简单、培养条件均一、传质和传氧比较好，容易扩大培养规 模，可借鉴细菌发酵的经验 缺点：体积小，较难采用灌流培养。常用反应器为搅拌和气升式 2.贴壁培养 适用条件：贴壁依赖性细胞和兼性贴壁细胞 优点：适用的细胞种类多，较容易采用灌流培养，使细胞达到高密度 缺点：操作比较复杂，需要合适的贴附材料和足够的面积，培养条件不 易均一，传质和传氧较差 （二）培养方法 * * * * * * * * 第五章 动物细胞制药 第一节 概 述 1665年英国物理学家虎克(Hooke)用自制的显微镜发现了细胞，实际上是死细胞留下的细胞壁，不久，荷兰科学家列文虎克(Leeuwenhoek)才真正观察到了细胞。从此认为细胞是一切动植物体结构和功能的基本单元，并创立了细胞学说 细胞学说的创立 细胞虽小（直径约10μｍ），但其结构复杂而精细，分工明确，并且具有巨大的生产能力，于是出现了组织或细胞培养 组织或细胞培养 组织培养或细胞培养是将组织或细胞从机体取出，在体外模拟机体体内生理条件进行培养，使之生存和生长。已有近百年历史了。随着细胞生物学、分子生物学、生物化学和基因工程等一系列学科和技术的发展，逐渐形成了细胞工程学 1.概念：以细胞为单位，（按人们的意志）应用生物学、分子生物学等理论和技术，使细胞的某些遗传特性发生改变，从而达到改良或产生新品种的目的，以及使细胞增加或获得产生某种特定产物的能力，从而在离体条件下进行大量培养、增殖，并提取出对人类有用的产品 2.方法：真核细胞的基因重组、导入、扩增和表达的理论和技术，细胞融合的理论和技术，细胞器特别是细胞核移植的理论和技术，染色体改造的理论和技术，转基因动植物的理论和技术，细胞大量培养的理论和技术，以及将有关产物提取纯化的理论和技术 细胞工程 第二节 动物细胞的形态和生理特点 一、动物细胞的形态 动物细胞属于真核细胞，结构复杂，分化精确，不同细胞执行不同的功能，为了适应各自的功能，细胞特化成不同的形态 如 神经细胞具有很长的分支，很多的