牛腔前卵泡卵母细胞体外受精研究的论文.pdfVIP

中同告牧兽医’≯会动物繁殖学分会第f。阴届学术研讨会论文集 牛腔前卵泡卵母细胞体外受精研究 禹学礼，栗颖华，邓雯，孟雨 河南科技人学动物科技学院，河南洛阳47l003 外培养(IvC)进行了系统研究。结果显示：腔前卵泡卵母细胞成熟率、受精后的卵裂率均显著低于直径2～6mm以及直径6衄以上 卵泡卵母细胞。而腔前卵泡卵母细胞的退化率则显著高于直径2—6衄和直径6咖以上卵泡卵母细胞。腔前卵泡卵母细胞没有发 育到桑椹胚：而直径2—6咖以及6咖以上卵泡卵母细胞则分别有11．76％和14．47％发育到桑椹胚。对冻精分别采取直接离心法． 上游法和下潜法处理，用上述3种方法获得的精子分别对腔前卵泡卵母细胞进行IvM、IVF和IVC，比较其卵裂率。结果显示：上游 法与下潜法之间卵裂率，下潜法与直接离心法之间卵裂率、上游法与直接离心法之间卵裂率差异均不显著。 关键词牛，腔前卵泡，卵母细胞，体外受精 目前，牛卵巢卵母细胞体外成熟、体外受精研究主要以有腔卵泡为主，对腔前卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精 的研究很少。牛腔前卵泡卵母细胞体外成熟的研究，可为牛体外受精等提供更广泛的实验材料，对研究卵母细胞的 体外生长、体外成熟机制具有极其重要的意义。本实验主要以腔前卵泡卵母细胞的体外成熟率、卵裂率以及受精后 胚胎的桑横胚率为指标，以有腔卵泡卵母细胞的体外受精为对照组，研究腔前卵泡卵母细胞是否具有体外成熟、受 精和发育能力。 l材料与方法 1．1材料 的保存液中，于3 +50Ug／ml庆大霉素。 LH由宁波市激素有限公司；Hepes为华美生物工程公司生产；FCS、矿物油、咖啡因、肝素、透明质酸酶等试剂均为美 国sigrna公司生产；倒置显微镜为NⅨON2000．u型；二氧化碳培养箱为美国Foma3lll型。 1．2方法 ． 巢表面2～6mm的腔前卵泡抽净，再以手术刀片横纵方向切割卵巢得到直径2r砌以下的腔前卵泡卵母细胞。只选 取具有致密卵丘的卵母细胞(cumulusoocytecomplexes，COCs)进行实验。 1．2．2腔前卵泡卵母细胞的筛选与成熟培养在体视显微镜下，检取直径2咖以下腔前卵泡卵母细胞。将其先用PBS ／滴)。培养条件为5％C02，39℃，饱和湿度(以下均同)。 后于50ul受精液微滴中加入loIIl经过获能处理的精液，置于C02培养箱共同孵育6～8小时。 半量更换培养液。受精后48小时统计卵裂率，吸弃未分裂的单细胞。 1．2．4实验设计 腔前卵泡卵母细胞体外受精实验：实验分3组，分别为直径2mm以下腔前卵泡卵母细胞组、直径2～6mm卵泡 卵母细胞组和直径6衄n以上卵泡卵母细胞组，将上述3组有致密卵丘细胞层完全包裹着的卵丘卵母细胞复合体 (COCs)分别进行IVM、ⅣF和ⅣC，并比较其成熟率、卵裂率和桑椹胚率。 不同冻精处理方法对腔前卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响：对冻精分别采取直接离心法、上游法和下潜 法处理，用上述3种方法获得的精子分别对腔前卵泡卵母细胞进行IVM、M和IVC，比较其成熟率、卵裂率和桑 椹胚率。 125数据处理所得数据以百分数t检验及平均数t检验进行统计学处理。 2结果与分析 基金项目：陕西省重大科技々项”肉牛、奶牛优质高效养殖关键技术研究与示范”(2006Kz07．G1)：洛阳市科技攻关重大项目(030218)。 140． 中固齑牧田医学会动物欺绮学分会第t‘叫届学术研it会论文集 注：表r}JI司一列标注小H字母表示差片显著：标注村|同。}母表／Ji差异小显著 11．76％和14-47％发育到桑椹胚(PO．011。 2．2不同冻精处理方法对腔前卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响 表2冻精处理方法对腔前卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响 注：表中同‘列标注和同’#母的表示差异不显著 理的精子进行体外受精后卵母细胞的卵裂率虽然比直接离心法高1．65％，但差异不显著(P0．05)。 3讨论 3．1直径2mm以下腔前卵泡卵母细胞的体外受精卵泡的直径是影响卵母细胞体外成熟的因素之一。有研究表明随 牛卵泡直径的增加，其中卵母细胞体外培养的成熟率逐渐七升，这与本实验的结果相符。在体内正常生理条件下，卵 泡直径越大，其中的卵母细胞发育程度越高，腔前卵泡卵母细胞正处于生长后期，正进行活跃的RNA