补体介导的细胞毒试验(教学).pptVIP

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2017-08-20 发布于湖北
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补体介导的细胞毒试验(教学).ppt

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补体依赖的细胞毒实验 Complement-dependent cytotoxicity 实验目的实验原理实验主要材料操作步骤一、小鼠胸腺细胞悬液的制备 4~6周龄小鼠断颈处死，取出胸腺放至含有3 mL RPMI 1640培养液的平皿中，以剪刀和镊子将组织处理成单细胞悬液，利用移液器取出后放入试管内备用。操作步骤结果观察台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有意义。 LOGO * LOGO 1 细胞毒实验的原理 2 补体依赖细胞毒实验的原理及基本操作步骤 3 补体依赖细胞毒实验的应用 + 补体台盼蓝染液抗原与抗体结合小鼠抗?血清（Ab） 3. 补体新鲜豚鼠血（补) 4. RPMI 1640培养液，载玻片、盖玻片、一次性试管 5. 台盼蓝染色液实验材料需要收回的剪刀、镊子、玻璃培养皿。胸腺注意事项：小鼠断颈要迅速、彻底，以防小鼠挣扎过程中出血过多，也可事先摘眼球放血。 ? 振荡混匀，置37?C水浴箱，10min ? ? 振荡混匀，置37?C水浴箱，20min ? 0.4%台盼蓝各管加1滴，混匀，室温2min ? 振荡混匀，滴片加盖玻片，镜检 Ag+Ab + complement 二、细胞毒实验：按下表加样 PBS A B A. 对照组 B. 实验组注意事项：台盼蓝染色后放置时间不能太长，否则出现假阳性。 LOGO