人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装.pdfVIP

蚌埠医学院学报 2015年 1月第40卷第 1期 7 [文章编号]1000-2200(2015)01-0007-04 · 基 础 医学 · 人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装 王 露，李 见，翟玮玮，李玉云 [摘要]目的：构建人凋亡相关因子(Fas)基因短发夹RNA慢病毒载体，实现沉默人脐带间充质干细胞Fas基因的表达。方法： 根据 Fas基因mRNA序列 ，设计4组靶向Fas基因的短发夹 RNA序列，合成、退火形成双链 DNA片段，与经过DNA内切酶 BamHI、EcoRI双酶切后的LV3载体连接转入感受态细胞，对长出的克隆进行菌落 PCR鉴定，并对阳性克隆进行测序及比 对分析。通过转染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。结果：经酶切及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功，通过荧 光显微镜观察证明病毒转入293T细胞 ，感染效率 90％，并获得高滴度的慢病毒载体，病毒滴度为3×10TU／ml。结论：成功 构建人 Fas基因RNA干扰慢病毒