血清碱性磷酸酶活性测定(第一组).pptVIP

血清碱性磷酸酶活性测定 磷酸本二钠法 酶活力测定与酶法分析 酶活力测定和酶法分析在医学上的应用 实验操作 取试管4支，按下表操作： * * 去除PPT模板上的--无忧PPT整理发布的文字 首先打开PPT模板，选择视图，然后选择幻灯片母版 然后再在幻灯片母版视图中点击“无忧PPT整理发布”的文字文本框，删除，保存即可 更多PPT模板资源，请访问无忧PPT网站-- 使用时删除本备注即可 展示您的作品,PPT模板作品投稿绿色通道 :chinappt2011@ 将此幻灯片插入到演示文稿中 将此模板作为演示文稿（.ppt 文件）保存到计算机上。 打开将包含该图像幻灯片的演示文稿。 在“幻灯片”选项卡上，将插入点置于将位于该图像幻灯片之前的幻灯片之后。（确保不要选择幻灯片。插入点应位于幻灯片之间。） 在“插入”菜单上，单击“幻灯片（从文件）”。 在“幻灯片搜索器”对话框中，单击“搜索演示文稿”选项卡。 单击“浏览”，找到并选择包含该图像幻灯片的演示文稿，然后单击“打开”。 在“幻灯片（从文件）”对话框中，选择该图像幻灯片。 选中“保留源格式”复选框。如果不选中此复选框，复制的幻灯片将继承在演示文稿中位于它之前的幻灯片的设计。 单击“插入”。 单击“关闭”。 PPT模板来源于互联网,版权归原作者所有,如有问题请与站长联系 * 酶活力测定 酶活力：即是酶活性，是表示催化某一特定反应的能力。可以用在一定条件下所催化的某一特定化学速度表示。 酶催化反应速度越快，酶活性 ，反之则愈低。 底物减少量或生成物增加量 酶促反应速度= 单位时间 影响酶促反应速度的因素包括底物浓度、酶浓度、ph值、温度、激活剂、抑制剂等。 酶活力单位指：在特定条件下1分钟能将1微摩尔底物转化为底物所需酶量，或转化底物中1微摩尔的有关基团的酶数。 酶的比活力：单位质量酶蛋白或单位体积酶制剂所含有酶活力单位数。 方法： 1.终止测定法（定时法或终点法） 2.动力学分析法（连续监测法或速率法） 3.物质含量的测定方法 酶法分析 ！指应用酶作为工具定量测定某种物质含量的分析方法。 （一）单酶反应定量法 1、直接测定底物的含量 2、由辅酶变化量测定底物量 （二）偶联酶反应定量法 E1 E2 A B C 实验目的 1.熟悉酶活性测定方法的一般原理 2.掌握血清ALP测定原理与临床意义 3.熟悉终止法和动力学测定法 实验原理 在PH10 环境中，ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，苯酚与4-氨基安替比林反应生成色素原，该色素原经铁氰化钾氧化生成红色醌亚衍生物。测定红色物质的吸光度就可以计算酶活性的大小。 反应式如下：磷酸苯二钠+H2O——苯酚+磷酸氢二钠 苯酚+4-氨基安替比林——红色醌亚胺衍生物 实验器材和试剂： （一）器材：5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可调式移液器，721E分光光度计，1cm比色皿，37℃ 恒温水浴 （二）试剂： 1．0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0) 称取无水碳酸钠6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于800ml蒸馏水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。 2．20mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水煮沸，称取磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2分子结晶水，则应称取2.54g)加入煮沸的蒸馏水中使其溶解，冷却后用煮过的冷蒸馏水加至500ml，再加氯仿2ml，置冰箱保存，此为底物溶液。 3．铁氰化钾的硼酸溶液 称取铁氰化钾2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混合后，加蒸馏水至1 000ml，置棕色瓶中避光保存(如出现蓝绿色即弃去)。 4．酚标准工作液（0. 05mg/ml）：购买合格的二级标准品。 测定管(T) 标准管(S) 空白管(B) 对照管(C) 血清（ml） 0.10O 酚标准液 0.100 蒸馏水 O.100 酸盐缓冲液 0.100 0.100 0.100 0.100 混匀。37 度水浴保 温5分钟， 同时将底 物液预热。 底物液 1.00 1.00 1.00 1.00 混匀。 37度水 浴保温 15分钟 铁氰化钾溶液 3.00 3.00 3.00 3.00 血清 0.100 立即混匀。用510nm波长比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度。 计算 ALP活性=（A测定—A对