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 2、作为载体的必要条件： 能自我复制 有切割位点 有遗传标记基因 另外，对受体细胞无害、容易分离等 练习 1、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因 的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 2、基因工程常用的受体细胞有（ ） （1）大肠杆菌 （2）枯草杆菌 （3）支原体 （4）动植物细胞 A. （3）（4） B. （1）（2）（4） C. （2）（3）（4） D. （1）（2）（3） 蛋白质工程的基本原理 何谓蛋白质工程？ 　 在现代生物技术中，蛋白质工程出现得最晚，是在20世纪80年代初期出现的。1983年 “蛋白质工程”这个名词出现后，随即被广泛接受和采用 。 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。 蛋白质工程的进展和前景 （二）蛋白质改造工程举例——胰岛素改造 　 天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素从注射部位进入血液，从而延缓了其降血糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素B23-B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基，则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已通过临床实验。 　 * 现代生物科技专题 基因工程 细胞工程 胚胎工程 基本工具 操作程序 生产应用 载体 DNA连接酶 限制性核酸内切酶 目的基因的检测与表达 目的基因导入受体细胞 基因表达载体的构建 目的基因的获取 转基因动物 转基因植物 工程菌 基因治疗 蛋白质工程 基本原理 练练 练练 1、限制酶的作用：（体现了专一性） 2、限制酶的作用原理： 4、用途： 5、来源和种类：微生物、几千种 3、作用结果： “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 1）能识别特定核苷酸序列； 2）从特定部位的两个核苷酸之间切开。 催化磷酸二酯键断裂 形成黏性末端、平末端 1）切割目的基因和运载体（基因工程） 2）保护自身细胞原有的遗传信息 （原核微生物细胞） “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 “分子缝合针”——DNA连接酶 1、DNA连接酶的作用： 2、作用原理： 3、作用结果： 4、用途： 5、种类： DNA聚合酶与DNA连接酶 连接DNA片段 催化磷酸二酯键形成 获得重组DNA分子 1）构建基因表达载体（基因工程） 2）基因修复（原核微生物细胞） 1）E.coli DNA连接酶 粘性末端 2）T4 DNA连接酶 粘性末端和平末端 1、载体的用途： 1）运载工具 2）在受体细胞内对目的基因进行大量复制 “分子运输车”——载体 3、载体的种类： 1）细菌质粒 2）λ噬菌体的衍生物 3）动植物病毒 能复制并带着插入的目的基因一起复制 切割位点 有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 “分子运输车”——载体 1、不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 2、以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 C 练习 3、有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 练习 步骤一：目的基因的获取 方法1、从基因文库中获取 方法2、利用PCR技术获取和扩增目的基因 方法3、人工合成 步骤二：基因表达载体的构建 步骤三：将目的基因导入受体细胞 ——植物细胞 另有：基因枪法和花粉管通道法 步骤三：将目的基因导入受体细胞 ——动物