鸡新城疫病毒荧光双链引物实时荧光PCR检测方法地研究.pdfVIP

鸡新城疫病毒荧光双链引物 实时荧光PCR检测方法的研究 李军!，吴时友1，尹燕博1，牛钟相q (1．山东澳兰生物工程研究院，青岛266101； (2．2．山东农业大学动物科技学院，泰安271018；) 【摘要】根据鸡新城疫F糖蛋白的保守基因序列，设计一对引物，称之为正引物。根据正引物设 计一对与之相互补的引物，称之为负引物。正引物的5’端标记FAM，负引物的3’标记淬灭剂DABCYL。 反应体系中进行引物杂交后，由于正、负引物完全互补，FAM产生的荧光被标记在负引物上的DABCYL淬 灭掉。这样，利用杂交后生成的荧光双引物对鸡新城疫及其他四种鸡传染病病毒包括禽流感、传染性 喉气管炎、传染性支气管炎和支原体进行了实时荧光PCR检测试验。结果表明，只有以鸡新城疫标准阳 性克隆质粒为模板的管中能够检测到荧光信号，其他管中没有信号产生。由于整个检测过程在封闭管 状态下进行，污染较少，因此该方法比常规PCR特异性要高的多。总之，该方法特异性强，灵敏度高， 重复性好，在鸡新城疫临床诊断和出入境检疫ee有着广阔的应用前景。 鸡新城疫(Neweastle 血为典型病变的高