硝化细菌的分离与鉴定.docVIP

硝化细菌的分离与鉴定 要筛选生长速度快、硝化作用强的硝化细菌用于水产养殖水处理。硝化细菌包括亚硝化 菌和硝化菌两个生理菌群，分别可将水中的氨态氮转化为亚硝酸盐和硝酸盐。实验结果 表明经5周培养，亚硝化菌可使培养液中的氨氮含量下降到60％，硝化菌可使培养液中的 亚硝酸盐含量下降到?60％。实验可通过测定培养液中亚硝酸盐的含量变化来测定细菌的 氨转化作用或硝化作用。? 关键词：硝化菌，亚硝化菌，硝化作用，筛选。? 氨氮和亚硝酸盐都是在水产养殖过程中产生的有毒物质，且亚硝酸盐还是强烈的治癌物 质，因此如何降解这两种物质，是科学工作者近年来的工作重点。? 硝化细菌是一类具有硝化作用的化能自养菌，包括硝化菌和亚硝化菌两个生理菌群，其 主要特性是自养性，生长速率低，好氧性，依附性和产酸性等。可通过NH4+→?NO2-?→ NO3-这一过程将NH4+转化为NO3-。能有效降低水体中氨氮及亚硝酸氮的含量，对水产养 殖业及环境保护具有重要意义。硝化细菌是生物硝化脱氨中起主要作用的微生物，直接 影响硝化效果和生物脱氨的效率。? 研究表明，水体中硝化细菌的浓度对生物脱氨具有十分重要的意义，由于大多数硝化细 菌生长缓慢，硝化及脱氨效果欠佳，处理水产养殖污水的效果不是很好。因此筛选出生 长速率高硝化作用强度大的硝化细菌有很大的用途。? 本文对硝化细菌的研究主要在富集培养和固定化细胞方面，能够有效提高硝化细菌的产 率和硝化细菌的利用率。通过富集培养的硝化细菌浓度是未经富集培养的12.5～20.0倍 ，利用细胞固定化技术可使氨氮去除率提高16.5个百分点。国外在硝化细菌的培养方面 的研究已有一些专利技术，其中一些已形成工业化生产，但产品价格较昂贵，并且必须 不断向反应器中补充流失的硝化细菌。硝化作用包括两个步骤：氨转化为亚硝酸盐和亚 硝酸盐转化为硝酸盐，这两个步骤分别由亚硝化菌和硝化菌完成，至今还未发现有能将 氨直接转化为硝酸盐的细菌。? 氨和亚硝酸分别是亚硝化菌和硝化菌的唯一能源。对于硝化细菌来说生长环境中的温度 对其影响较大，pH值和盐度的影响相对较小。大多数硝化细菌的合适生长温度为10～38 ℃，高于20℃时硝化细菌的活性较高，但超过38℃消化作用将会消失。当环境气温低于 20℃时，氨的转化会受到影响。? 一般认为，适宜硝化菌和亚硝化菌生长介质的pH值分别为6.0～8.5和6.0～8.0。水体DO 的高低影响到好氧、厌氧微生物的比例，大多数研究人员认为DO的浓度应当控制在1.0～ 2.0?mg/L，低于0.5?mg/L时硝化作用明显减弱。另外，碳氮比、碱度等对硝化及脱氨均 有影响。? 本文中筛选硝化细菌的依据主要是生长速率和硝化作用强度，生长速率主要采用活菌计 数，因为硝化细菌的液体培养基中有沉淀，用OD600测的值误差较大。氨转化效率和硝化 作用强度主要用比色法测定，利用亚硝酸根的显色反应。亚硝化菌测定其培养液中亚硝 酸根的增加量，硝化菌测定其亚硝酸根的减少量。? 1?材料和方法? 1.1?实验材料? 1.1.1?菌种? 由海洋中分离得到? 1.1.2?培养基? 亚硝化菌培养基?(NH4)2SO4?0.5g?NaCl?0.3g?FeSO4#8226;7H2O?0.03g?K2HPO4?1g? MgSO4#8226;7H2O?0.03g?CaCl2?7.5g?蒸馏水?1000ml?PH?自然固体培养基加5％琼脂?硝 化菌培养基?NaNO2?1g?MgSO4#8226;7H2O?0.03g?MnSO4#8226;4H2O?0.01g?K2HPO4? 0.75g?Na2CO3?1g?NaH2PO4?0.25g?蒸馏水?1000ml?PH?自然固体培养基加5％琼脂?肉汤培 养基牛肉膏?0.5％蛋白胨?1％氯化钠?0.5％琼脂?2％? 1.1.3?试剂? 牛肉浸膏?上海长阳生化制药厂蛋白胨?上海东海制药厂磷酸氢二钾?浙江临平化工试剂厂 磷酸二氢钠?南京化学试剂一厂磷酸氢二钠?南京化学试剂一厂氯化钠?南京化学试剂一厂? MnSO4#8226;4H2O?南京化学试剂一厂琼脂?江苏疾病预防控制中心微生物试剂厂（NH4） 2SO4?南京化学试剂一厂?FeSO4#8226;7H2O?上海试剂二厂?MgSO4#8226;7H2O?上海试剂 四厂?CaCl2?华东师范大学化工厂?Na2CO3?上海虹光化工厂?NaNO2?淮安化工二厂磺胺酸? 天津瑞金特化学品有限公司?α-萘胺?上海泗联化工厂? 1.2?实验方法? 1.2.1?硝化细菌的分离? 将采集到的海水样本分别放在两个培养皿中，分别加入亚硝化菌液体培养基和硝化菌液 体培养基，放在24℃地培养箱中培养5天，