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第33 卷 分析化学 （FENXI HUAXUE ） 研究报告 第6 期 2005 年6 月 ChineSe JOurnaI Of AnaIyticaI ChemiStry 789 ~ 792 铂电极表面生物素-亲和素固载单链 脱氧核糖核酸的电化学传感器 ＊ 王保珍 杜晓燕 郑 晶 金滨锋 （哈尔滨医科大学公共卫生学院，哈尔滨 150001） 摘 要 通过直接吸附将亲和素固定在Pt 电极表面，联于生物素标记的脱氧核糖核酸（DNA ）探针，制备了电 化学基因传感器，建立了Pt 电极表面修饰单链脱氧核糖核酸（SSDNA ）的方法。修饰电极与待测溶液中人工 合成的转基因食品中常有的花椰菜花叶病毒35S 启动子（CaMV 35S ）或根癌农杆菌终止子（NOS ）DNA 片段 3 + 进行杂交，以邻菲罗林钴络合物［CO（phen ） ］为杂交指示剂，循环伏安法测量，通过杂交前后指示剂峰电流的 3 变化检测DNA 杂交的量。研究了电极修饰、杂交反应及测量的适宜条件，在优化实验条件下，峰电流的差值与 DNA 杂交量之间有良好的线性关系，相关系数! = 0. 9996 。杂交后的电极经热变性再生，可重复使用多次。 关键词 电化学脱氧核糖核酸（DNA ）传感器，亲和素-生物素体系，转基因食品，循环伏安法，化学修饰电极 ! 引 言 电化学DNA 生物传感器结合了DNA 序列杂交的特异性和电化学测量灵敏、简单等特性，而备受关 注［1 ~ 3 ］。构建DNA 传感器应先将DNA 探针固定到载体表面，然后通过杂交反应检测其互补链片段。 因此， SSDNA 在电极表面的固定化是电化学DNA 传感器的关键步骤。目前DNA 探针的固定方法主要 ［3 ］ ［1，4 ，5 ］ ［2 ］ ［6 ］ ［5 ］ 有表面富集法 、共价键合法 、自组装膜法 、生物素-亲和素方法 等。刘盛辉等 将石墨电极 表面硅烷化导入氨基，然后用碳二亚胺（EDC ）作偶联活化剂，在电极表面固定单链DNA 。郑赛晶等［7 ］ ［8 ］ 采用微孔穴充石蜡石墨电极固载SSDNA 。黄海珍等 对DNA 探针的固定方法作了详细评述。 生物素（biOtin ）和亲和素（avidin ）之间具有高度亲和性及多级放大效应，而且亲和素可以直接不可 逆地吸附到Au 、Ag 、Pt 等电极表面形成单分子层。Du 等［9 ，10 ］曾利用亲和素这一特性，成功地将该体系 用于 ［6 ］ Pt 电极表面酶的固定化。高志贤等 采用巯基自组装技术，通过碳二亚胺和N-羟基磺基琥珀酸 亚胺偶联剂将亲和素固定于金电极表面，联于生物素标记的SSDNA 片段。本研究以Pt 电极为基底电 极，首先将亲和素直接修饰在Pt 电极上，然后利用亲和素-生物素体系分别将转基因食品中常含有的花 椰菜花叶病毒启动子（CaMV35S ）和根癌农杆菌终止子（NOS ）两段SSDNA 片段固定在电极表面，研制了 电化学DNA 传感器，对实验条件进行了探索，以差分定量法测定目的基因，对人工合成及大豆蛋白粉中 转基因成分DNA 片段进行了识别测定。 # 实验部分 # . ! 仪器与试剂 CHI660A 电化学分析仪（上海辰华仪器有限公司）；恒温培养箱（上海跃进医疗器械一厂）；超声波