免疫辣根过氧化物酶染色法诊断猪弓形虫病地研究.pdfVIP

第27卷增刊 内 蒙古农业大学学报 V01．2702S 2005年7月 14．2005 ofInner Journal MongoliaAgriculturalUniversity 文章编号：1009—3575【2005)02S一0027—04 免疫辣根过氧化物酶染色法诊断猪弓形虫病的研究+ RAPID OF TOXOPLASMOSISINPIGSBY DIAGN+OSIS IMMUNOPERl0XIDASESTAININGMETHOD 王小波．许益民 (扬州大学兽医学院．扬州225009) 捅要： 目的：探讨免疫辣根过氧化物酶染色法快速诊断猪弓形虫病的可行性。方法通过痫猪的牺床表现、病猪 组织切片的常规H．E．染色和免疫辣根过氧化物酶染色法作出初步诊断。采集病猪的各脏器组织，研磨后接种 ICR鼠，分离鉴定病原。结果常规H．E．染色和免疫辣根过氧化物酶肇色法两种方法都能发现弓形虫的但包囊或 速殖子，但是，HE．染色切片仅能在个别视野中发现弓形虫，而免疫辣根过氧化物酶染色法可在多个器官切片的 多个视野中观察到更多的被染戚棕黄色的弓形虫速殖子和很包囊。结论免疫辣根过氧化物酶染色法是猪弓形虫 病的诊断方法。 关键词： 猪；弓形虫；免疫辣根过氧化物酶染色法；诊断 弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma 发现于突尼斯的刚地梳趾鼠体内。1923年在人体内发现弓形虫。猪弓形虫病的急性暴发最早见于美国俄 亥俄州一个猪场(Farrell，1952)…。 1981年，Conley等首先将免疫辣根过氧化物酶法应用于动物弓形虫病的研究和人类弓形虫病的诊断。 以后，国内外学者相继应用免疫辣根过氧化物酶法研究弓形虫和弓形虫病．如KittaS(1984)研究弓形虫脑 T A 病；FrenkdJI(1987)研究弓形虫包囊破裂的机制；Sims (1994)研究弓形虫在感染鼠体内细胞园子的变化；BroulandJ RH株在实验小鼠体内的动态分布。这些研究结果表明，免疫辣根过氧化物酶法不仅使包囊着色，还可以使 游离速殖子及感染细胞内的虫体着色，此法灵敏度高，特异性强。 本文目的是探讨间接辣根过氧化物酶免疫组化方法快速诊断猪弓形虫病的可行性。 1材料与方法 收治的临床疑似弓形虫感染病猪，病仔猪体温41℃左右，精神萎顿。食欲减退或废绝。粪便干燥。流水样鼻 液。咳嗽，呼吸困难，呈犬坐状。在耳翼，鼻端。蹄部，下腹部出现紫红色斑块，间或有小出血点。耳尖发生干 性坏死，形成痂皮。体表淋巴结，尤其是腹股沟浅淋巴结明显肿大。运动时后躯摇摆。 1．2弓形虫虫株猪源性汤山分离株(NT株)，购自江苏省农科院兽医研究所。 试剂均属国产分析纯。 1．4设备石蜡切片机、病理组织学染色设备、湿盒、37℃恒温箱、冷冻离心机、分光光度计。 2方法 2．1病猪病理学检查和采样剖检病猪并观察肉眼病变。采集心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、肺门淋巴结、肠 +鉴銎晕冒；2国00采5经-0贸6委-赍助项目(2002一04)．插州大学高层敬^才科研启动基盘项目 作者饨介：t，J,R(1976一)．男．内蒙古赤峰^，扬州大学助教磺士．主要从事病理学方面的研究 内 蒙 古 农 业 大 学 学 报 2005年 系膜淋巴结等组织，厚度3cm～4cm，置于10％缓冲福尔马林中固定。 2．2病猪组织的石蜡切片组织块经过修整、70％～100％系列酒精脱水、二甲苯透明、透蜡和包埋，制成蜡 块后进行切片，切片厚度约5urn。 2．3兔抗弓形虫抗体的制备 2．3．1 化后反复冻融，超声波裂解，4℃12 浓度。一20℃保存备用。 积弗氏不