汉黄芩素诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡地研究.pdfVIP

汉黄芩素诱导人肝癌细胞Bel．7402凋亡的研究 余建清’，柳惠斌。，邹国林3 (1．武汉大学人民医院药学部，武汉430060； 2．武汉大学药学院，武汉430072；3．武汉大学生命科学学院，武汉430072) 3¨g‘mL-1， [摘要]目的：研究汉黄芩素诱导Be卜7402细胞凋亡的作用。方法：汉黄芩素20“g·mL一，1 6u 02细胞一定时间后，MTT法测细胞的生长抑制作用，荧光显微镜法、琼脂糖 g-mL。分别处理Bel一74 凝胶电泳法、流式细胞仪法分别检测汉黄苓素诱导的Bel-7402细胞凋亡。结果：汉黄芩素能明显抑制 Bel-7402细胞的生长，且呈浓度依赖性，48h的ICso为8．9“g·mL一；用浓度为13、20“g·mLl的汉黄 芩素作用Be卜7402细胞56h，细胞出现明显的形态学改变，琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯状条带； 流式细胞仪检测经13、20u 芩素在浓度为13、20“g·mL叫时，能明显诱导Be卜7402细胞凋亡。 [关键词】汉黄芩素；Bel一7402细胞；凋亡 脂多糖诱导的IL．1B合成降低了50％以上，这种黄酮类化合物对炎症抑制作用几乎与作为标准抗炎药类固 醇的强的松龙的作用相似pJ。近年来研究表明，汉黄芩素能够抑制肿瘤细胞株的增殖。 过清除多余的细胞而在各种生理过程中发挥作用，同时多种疾病的发生也与细胞凋亡紊乱有关。随着对 肿瘤发病机理的深入研究，有关细胞增殖凋亡失衡在舯瘤发生中的作用日益受到人们的重视。本文从诱 导肿瘤细胞凋亡的角度探讨了汉黄芩素的抗肿瘤机制，从而为其临床应用提供理论依据。 1材料和方法 1．1材料 清购白杭州四季青公司。 1．1．2仪器美国FACScan型流式细胞仪；LEICADMLTherrno荧光显微镜 的RPMI．1640培养基在37℃，5％C02孵箱中培养。 1．2方法 1．2．1 摄片。 1．2．3琼脂糖凝胶电泳法不同浓度的汉黄苓索作J_fj (PBS)洗涤数次，加入I r．min。‘离 反应30min(379C)。取上述样品lo血，在1．5％琼脂糖凝胶屯泳，60V电泳2h，摄像。 1．2．4流式细胞仪观察细胞凋亡 Quest软件分析。 f激发光波长488nm)，使用Cell 2结果 2．1 RTT检测结果 现一定的剂量依赖性。 90 80 79 零 580 量 o 。r-。-50 ·三 40 30 5 10 15 20 25 30 [wogonin】mg／L 图1 汉黄芩素对Bel-7402细胞的抑制作用 2．2形态学检测结果 核固缩边集呈星月状荧光．DNA片段化而出现浓染致密的块状或颗粒状荧光，另有浓染的强荧光性颗粒 理的细胞呈弥散均匀的弱荧光。 A B C D 图2荧光显微镜观察汉黄芩素对Bel一7402细胞的诱导凋亡作用(56h) 2．3 DNA琼脂糖凝胶电泳结果 组只能看见非常模糊的条带而对照组则无条带出现。 圈3琼脂糖凝胶电泳检测汉黄芩素诱导的Bel．7402细胞凋亡