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GTC实验室的操作程序 一、精液采集 人工授精与自然交配的根本不同在于，自然交配中许多公猪的工作，在人工授精中都由人工授精技术员来完成了。在人工授精中，技术员必须提供良好的精液处理、包装条件，以保证精子能够维持较高的受精能力。所以要求人工授精技术员要能够很好的理解精子生产的自然过程，以便能够在人工授精实验室尽可能的模仿这个过程。 、采精时需要的设备 1、采精容器，应该使用那些能够保温并且容易消毒和清洗的容器。 2、牛奶过滤纸或手术消毒纱布。 3、一次性乳胶手套或尼龙手套。注意，有些种类的手套对精子有毒害作用。 4、消毒、干燥以及贮存设备。 （二）、采 精 即使使用手套，也要在采精前洗净并擦干采精的手。 排空积尿，用干净的毛巾擦净公猪的下身。 引导公猪爬上假台畜。换下脏手套，换上干净的手套。 用戴手套的手抓住其阴茎，模仿母猪的子宫颈形成一个有力的螺旋，锁住阴茎并顺势拉出。 一旦成功，公猪将稳定下来，开始射精。射出精液可分为几个不同的部分。 -- 首先的胶体部分：不要收集，其中的精子很少。 -- 清亮部分：含有的精子很少，不必收集。 -- 富精部分：呈乳状，含有大部分精子，需要完全收集。 -- 最后的胶体部分：不要收集。 要注意避免包皮液、尿液混入到射出精液中，在采精过程中包皮液会沿着阴茎流下来混入精液中，杀死精子。可以用纸巾缠绕在阴茎上，避免这个问题。 公猪射精的时间可能持续5-15分钟。因此要有耐心，在公猪完全射精完毕之前不要松开采精的手。 采精后马上冲洗采精区，否则干了的精液和胶体很难清洗。 二、精液的处理 精液处理的目的，就是以一种高效、低成本的方法来最大数量地获取高质量精液头份数。 （一）、人工授精实验室所需的基本设备 显微镜：应包括100倍，400倍1000倍物镜（油镜），双筒目镜，恒温载物台。 盖玻片，载玻片和毛细吸管。 电子称 温度计：两根30cm（12英寸）的温度计。 若干广口容器：体积从1L到5L的玻璃或塑料广口容器。 精液包装设备 光密度仪 水浴锅：用来控制稀释液的温度。 精液分装袋或输精瓶及瓶盖。 精液贮存设备 消毒设备 输精管：橡胶输精管或一次性输精管。 净水制造系统 烘干设备：用来干燥和贮存所有采集和检测精液用的设备。 （二）、精液质量的评估 精液的质量评估应在采精后立即进行。有些评估项目在精液稀释前进行，而有些评估项目要在精液稀释后进行。 原精检测项目 稀释后的检测项目 气味、体积 稀释后活力 数量、最初活力、 贮存后活力 最初形态 混合精液的活力 测原精活力 用显微镜将原精样本放大到100倍和400倍来评估原精活力。观察的时候要选取载玻片上的几个不同点，以使样本具有代表性。如果原精活力不高，在0分-1分之间，那就再制作一个样本，但必须保证载玻片盖玻片以及吸管的温度为35℃。 2．稀释后精液的活力 取一滴稀释后的精液，放在显微镜下，可观察到样本中的单个精子，稀释精液的活力可以用样本中，向前直线运动精子的百分比表示。如果活力低于60%就抛弃原精。 （三）、稀释精液 精液稀释有两个原因：增大体积以提高其利用率；为精子提供一个有利于保存的环境。 1．准备稀释液 用电子称准确称取需要量的稀释剂。要遵照生产商说明的使用量来做。注意不正确的稀释液浓度将会杀死精子。 在称取好所需量的稀释剂粉剂后，把其加入到一定量的蒸馏水中。预热蒸馏水到30℃-35℃ ，这可使稀释剂溶解的更快。 准备每日用量的新鲜稀释液，不要在其配制好，超过24小时以后再使用；稀释液最好在配制好60分钟以后使用。 2．稀释精液 使稀释液和精液温度相同是很重要的。在稀释精液前，测量精液和稀释液温度（精液温度大约为35℃），如果两者温度相差不超过±1℃，就可将适量的稀释液加入到精液中，并将两者轻柔混匀。每包装头份应至少含有20亿个有效精子，至多含有45亿个有效精子，输精体积至少为70ml。 一旦精液被稀释好，就可进行分装了。分装好后，贴好写有采精日期、公猪耳号的标签。然后发送或将其贮存在15℃-20℃的精液贮存箱中。 （ 6