保证鲎试验结果准确的探讨.ppt

从实验可以看出，温度对鲎试剂的灵敏度影响很大，保温温度在25～41℃之间，随着温度的升高，反应速度也升高，41℃尚未达到反应速度峰值，25℃ 时反应速度已相当快；在41～46℃之间，温度对鲎试剂的灵敏度无明显影响；达到49℃或更高温度时，随温度升高而使酶蛋白逐渐变性，则鲎试剂被破坏，反应速度反而降低。 2）保温时间 将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水稀释成2λ，进行鲎试验，37℃保温，分别在10、20、30、40、50、70min时观察，发现凝胶的形成状态随着时间的延长而坚固。 因此夏天室温较高，如果试验操作时间太长，细菌内毒素与鲎试剂混合液不等进入反应仪器反应已开始，实际反应时间超过1小时。由于室温不同，冬夏季节、南北地区之间的操作误差将会很大。即使在25℃准室温下操作，操作时间拖得过长，细菌内毒素含量较高时，测定误差也不会小。 谢 谢! 二、鲎试剂项目介绍 1、鲎试剂立项 1988年，本厂是广东省第一家，全国首批获准卫生部（88）卫药准字SJ-04号，并同时获得药品生产企业许可证。 2、国家火炬计划 1989年，本厂鲎试剂项目被列入国家级火炬计划。 鲎试剂活性定向生产工艺，于1991年通过广东省科委组织的科技成果鉴定。 (3)、鲎试剂活性定向生产工艺专利证书 1995年，申报国家发明专利，专利号：Z2 三、企业开展的部分工作 1、提供本行业最新的研究动态及相关资料 2、提供咨询服务 3、提供全面技术培训 4、提供具体品种的检查方法 5、提供全面的质量保证 * * 保证鲎试验结果准确的探讨 一、试验误差分析及改进措施 鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响 细菌内毒素工作标准品效价及使用的影响 实验器皿的的影响 样品成份及理化性质的影响 实验员的影响 环境的影响 1 鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响 鲎试剂的质量：抗干扰能力，稳定性； 鲎试剂灵敏度标示值的准确性 。 鲎试剂灵敏度的误差 是否用细菌内毒素国家标准品标定？ 标示值是否准确？ 2 细菌内毒素标准品引起的误差 细菌内毒素标准品种类 细菌内毒素标准品效价误差 细菌内毒素标准品操作误差 细菌内毒素单位表示误差 细菌内毒素标准品的错误使用 1） 细菌内毒素标准品种类 细菌内毒素国际标准品 细菌内毒素国家标准品 细菌内毒素工作标准品 2） 细菌内毒素标准品效价误差 细菌内毒素国家标准品与细菌内毒素工作标准品之间或细菌内毒素工作标准品与细菌内毒素工作标准品之间的生物效价存在一定的误差，用不同细菌内毒素标准品复核同一批鲎试剂灵敏度时可能存在一定的误差。中国药典要求“当λc在0.5λ-2λ(包括0.5λ和2λ)时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。”试验结果只要在这合格范围内表示鲎试剂标示灵敏度准确。 3） 内毒素标准品操作误差 取细菌内毒素工作标准一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75%酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内。 正确 （易折点）错误 注意：①只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上。 ②只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品。 ③若使用的为细菌内毒素国家标准品，可按其使用说明书中的方法将其稀释至规定浓度后分装保存。若为细菌内毒素工作标准品，为一次性使用。 4） 错误使用 有部分客户使用厂家生产的细菌内毒素来复核鲎试剂的灵敏度，这是一种错误行为，更有甚者使用厂家生产的细菌内毒素来交叉复核鲎试剂的灵敏度，这是一种严重错误行为。 3 实验器皿的影响 器皿的计量管理（校正） 器皿的选择标准 器皿的正确处理 1） 器皿的选择标准 鲎试验对器皿的要求：刻度准确；内表面光滑；易于清理。细菌内毒素检查实验不宜选用注射器，最好使用经过校正的刻度玻璃吸管或吸嘴。注射器刻度不精确，内壁磨沙面吸附内毒素，而且要特别注意注射器针头引入的铁离子对试验结果的干扰，故不宜选用注射器。 如果用量不大，使用频率不高，建议大家选用本公司提供的一次性耗材。无热原耗材是一种在此行业中被鉴定为无内毒素和β-葡聚糖污染的产品，其中包括, 无热原试管、无热原移液器吸头。这些产品可以给您的工作带来很大方便,另外，当实验出现误差时可首先排除器皿方面的因素,很快分析判断出误差原因。 2） 器皿的正确处理 2005年版《中国药品检验标准操作规范》278页——细菌内毒素检查法“实验准备”规定：“将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并烘干水分后，置洗液中浸泡4小时，取出将洗液沥干，用自来水将残余