丝状真菌蛋白质组分析.pdfVIP

第 卷 第 期 东 北 农 业 大 学 学 报 39 5 39(5):58~61 2008年 月 5 JournalofNortheastAgriculturalUniversity May2008 文章编号 ( ) 1005-9369200805-0058-04 丝状真菌蛋白质组分析 李 锐,贺 亮,邓旭明* (吉林大学畜牧兽医学院,长春 130062) 摘 要:试验建立液氮冷冻研磨、蜗牛酶消化破壁、尿素裂解、同时结合硫酸铵沉淀预分离的方法研究丝状真 菌蛋白质组,得到的肽片段混合物通过二维液相色谱分离检测,进行蛋白质组分析。本方法提高了蛋白的分离效率 和提取数量,特别是对于那些功能重要但丰度低的蛋白,适合于丝状真菌蛋白组学研究中目的蛋白的提取。试验共 鉴定了396个蛋白,包括了参与各种细胞生理过程的蛋白,为进一步开展动物丝状真菌蛋白质组学研究打下了良好 的基础。 关键词:丝状真菌;尿素裂解;蛋白质组 中图分类号: ; 文献标识码: Q949.32 Q51 A 皮肤丝状菌病是动物和人类公共卫生上具有 1 材料与方法 重要地位的人畜共患病,是皮肤丝状真菌寄生于 表皮角质层、爪、被毛等部位而发生的皮肤表层 1.1 实验菌株与培养基 疾病。目前,该类菌广泛分布于世界各地,除感 菌株为北京大学真菌研究中心保存的红色毛癣 染人之外,还可引起家畜、实验动物、野生动物 菌临床分离株BMU01672,培养基为马铃薯葡萄糖 等患病,并通过动物间或动物与人之间交叉传染。 琼脂( )斜面, 液体培养基。 PDA YPD 然而,与细菌和病毒相比,真菌的研究整体来说 1.2 红色毛癣菌的菌丝体培养 [1-2] 还比较落后 。红色毛癣菌(Trichophtonrubrum) 接种少许菌落于PDA斜面,28℃培养 7~10d 是皮肤丝状真菌中相当重要的一类,是常见的致 后,用 10mL无菌生理盐水反复冲洗斜面,冲洗 [3-4] 病性皮肤癣菌 ,一旦侵入机体可以引起较为严 液经 100目灭菌细胞筛过滤去除菌丝体,所得孢 [5] 4 -1 重的皮肤癣病,且病程持久,难治愈,易复发 。 子滤液经显微镜镜检计数。以 个· 的密度 10 mL 红色毛癣菌的广泛流行使其成为研究病源性丝状 将孢子接种于 100mLYPD液体培养基中,28℃, 真菌的代表性菌株。 -1 · 培养 ,培养物经细胞筛过滤,用 150rmin 7d 蛋白质组学已经成为 世纪生命科学与生物 21 ( )冲洗 次去除培养液获得菌丝体。